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1年
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大量
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上海沪震生物科技有限公司
pcDNA3.1(hyg)+ / pCDNA3.1-Hygro(+) / pcDNA3.1/Hygro(+)产品信息
订购信息
| 货号 | 载体名称 | 出品公司 | 载体用途 | 价格 | 到货周期 |
| HZ0008 | pcDNA3.1(hyg)+ / pCDNA3.1-Hygro(+) / pcDNA3.1/Hygro(+) | 哺乳动物表达载体 | 1000 900 |
现货 |
产品参数
载体用途:哺乳动物表达载体
原核抗性:Ampicillin(氨苄青霉素)
真核筛选标记:Hygromycin(潮霉素)
启动子:CMV promter
表达水平:高
5' 测序引物:CMV-f
3' 测序引物:BGH-r
载体拷贝数:高
载体描述
This pcDNA3.1/Hygro(+) vector is designed for high-level, constitutive expression in a variety of mammalian cell lines. It contains a Hygromycin selectable marker and a reverse-orientation multiple cloning site.
The pcDNA™3.1 Expression Vector Family
Three untagged versions of pcDNA™3.1 (available separately), each with a different selectable marker (Geneticin®, Zeocin™, or Hygromycin), are for use alone or in co-transfections. All three vectors offer the following features:
- Cytomegalovirus (CMV) enhancer-promoter for high-level expression
- Large multiple cloning site in either forward (+) or reverse (-) orientations
- Bovine Growth Hormone (BGH) polyadenylation signal and transcription termination sequence for enhanced mRNA stability
- SV40 origin for episomal replication and simple vector rescue in cell lines expressing the large T antigen (i.e., COS-1 and COS-7)
- Ampicillin resistance gene and pUC origin for selection and maintenance in E. coli
质粒图谱
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文献和实验wangch84 各位高手,兄弟最近忙于质粒构建,意图将一段长约4000 bp的片段,通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下: 1. 通过LA Taq酶扩增,并纯化回收目的片段(引物中带有酶切位点,保护性碱基=3,上游带有Kozak序列);由于回收效率很高,所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段,H2O 20 μl,10 X K BUFFER 4 μl,两种酶各2 μl,37℃作用过夜(12-14 h
培养 Hela细胞(ATCC)接种在合适的含附加成分的细胞培养基中,并在37℃,5%CO2 湿润环境下培养。细胞用胰蛋白酶消化、清洗并接种在E-Plate VIEW 96上。 转染 接种24小时后,分别用三种转染试剂X-tremeGENE 9、X-tremeGENE HP以及其他试剂(LTX和L2K),转染CMV启动子的GFP-pcDNA3.1质粒。转染根据指导手册说明,采用各说明书建议的最适DNA与转染试剂比例。所有实验重复三次。 实时细胞分析
xCELLigence系统实时监测低毒性X-tremeGENE DNA转染
试剂X-tremeGENE 9、X-tremeGENE HP以及其他试剂(LTX和L2K),转染CMV启动子的GFP-pcDNA3.1质粒。转染根据指导手册说明,采用各说明书建议的最适DNA与转染试剂比例。所有实验重复三次。 实时细胞分析 xCELLigence RTCA MP仪器连续监测实验全程细胞状态(从细胞接种到转染后三天)。测定每孔50 μl 细胞培养基的值作为背景电阻抗。每孔最终体积调整至100 μl,密度为4000个Hela细胞。接种后,电阻抗以固定时间间隔被测定。细胞
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