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- 2026年01月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Transgenic plant PRSV Rep strain nucleic acid detection kit (PCR- fluorescent probe)
- 库存：
10
- 供应商：
沪震生物
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验，合成实验等试验。
转基因植物PRSV Rep品系核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)常见问题：
一.没有扩增产物
1.循环温度：变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度，缩短退火或延伸时间
转基因植物PRSV Rep品系核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的改进与完善：
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段，其缺点是：
①Klenow酶不耐高温，90℃会变性失活，每次循环都要重新加，每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。
2）1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR，其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。
3）1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。转基因植物PRSV Rep品系核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)此酶具有以下特点：
①耐高温，在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率，因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别，将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法
为探针进行杂交，所得X光片成像结果如图2右侧所示。成像斑点清晰，三张重复膜的结果一致，被检转基因植株全为阳性，阴性对照处未检出杂交信号，阳性对照明显。 3、讨论 PCR的方法用于检测转基因植物非常简便，但是其高灵敏度的特点容易导致假阳性结果，须经PCR产物克隆测序最终确认，如果用于鉴定大批量的转基因植物将会相当的费时费力。为此我们借助芯片点样仪样品量少、操作方便、重复性好等优点，采用快速、安全的生物素标记探针杂交法对转基因植物的PCR产物进行鉴定。为保证结果的真实性，一方面将PCR
与携带目标位点染色体的两个染色单体进行可靠的杂交；否则，只有统计分析几个细胞间期的结果，才能识别杂交探针的位点。检测和鉴定转基因的染色体位点 [17~20 , 30 ]，或整合到寄主基因组的病毒序列[21~23 ] , 其情况是极其独特的，因此，需要付出更多的努力去调整 FISH 技术，以分析低拷贝或单拷贝序列，其原因如下。 首先，通过 Southern 杂交或 PCR 方法，确切地验证某一外源 DNA 分子是否已经整合到基因组中是非常困难的，有时甚至是不可能做的；第二，采用图位法定位染色
的DNA ，在实际操作中就需要较大量的植物材料来提取DNA ，而转基因植物的愈伤组织在无菌条件下经过筛选、重新分化后一般都比较细弱，不宜大量取样。如果外源基因在插入时发生基因重组，造成限制性酶切位点丢失，Southern 法也无法检测到。这些因素都制约了Southern法在T0代植物中检测外源基因拷贝数的应用。 二、荧光定量PCR方法 利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法可以用于测定原始品系中转基因的绝对拷贝数。实时荧光定量PCR技术是一种较新的DNA 定量方法。其定量的基本
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