核酸外切酶 III(E. coli)

核酸外切酶 III(E. coli)

规格：25KU|5KU|2500U
特性:
3´ →5´ 外切酶活性
非定向巢式缺失
定点突变
链特异性探针的制备
制备用于双脱氧测序的单链底物
概述:
该酶作用于双链 DNA，从 3´ OH 末端方向逐步切去单核苷酸。每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。
尽管可以作用于双链 DNA 的切刻产生单链缺口，但该酶最适底物是平齐末端或 3´ 凹陷末端 DNA。由于对单链 DNA 无活性，因此该酶无法切割 3´ 突出末端。3´ →5´ 外切酶活性对底物的切割程度随 3´ 突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端完全不能被切割。这种特性:可以用于对一端为抗性位点（3´ 突出端），另一端是敏感位点（平端或 5´ 突出端）的线性 DNA 分子进行单方向切割。
核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。温度、盐浓度:和酶与 DNA的比例对酶活性影响很大，应根据不同的反应调整反应条件:。
据报道，核酸外切酶 III 也有 RNase H、3´ -磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。
来源:
纯化自 E. coli K-12，BE257/pSGR3 菌株（B.Weiss 惠赠）。
反应条件:
1X BalbBuffer 1
[10 mM Bis Tris 丙烷-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活:70℃ 加热 20 分钟。
质保声明:
核酸外切酶 III 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位指 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟催化产生 1 nmol 酸溶性总核苷酸所需要的酶量。
浓度:
100,000 units/ml。
注意事项:
核酸外切酶 III 不能切割硫代磷酸酯键。因此，也可以通过引入一个 α-硫代磷酸核苷酸将 DNA 分子的一端保护起来，以进行单向切割。