- ￥8
- GTX
- 1pg/mol
- 上海
- YS05025B
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海雅吉生物科技有限公司
- 检测范围：
1pg/mol
- 检测方法：
酶联免疫法/双抗夹心法
- 样本：
血清，血浆，细胞，组织，体液等
- 规格：
48T/96T
产品优势：上海雅吉生物的试剂盒 吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体，适用多种标本类型并节约成本。其高效、灵敏、特异的抗体与高效、灵敏、特异的抗体使实验曲线更完美。是一款可以让您放心选购的ELISA试剂盒产品。
检 测 范 围 ：7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 ：本试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中小反刍兽疫抗体(PPRAb)含量。
实 验 原 理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中山羊小反刍兽疫抗体(PPRAb)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入小反刍兽疫抗体(PPRAb)，再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小反刍兽疫抗体(PPRAb)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中山羊小反刍兽疫抗体(PPR Ab)浓度。仪器、原料和试剂 仪器 聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、洗板仪。
标 本 要 求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
试剂及试剂配制
1. 抗原及酶标记抗体
①抗原： IgG
②酶标抗抗体：羊抗鼠IgG-HRP
2.包被液（CBS）：Na2CO3 0.8g，NaHCO3 1.46g，水溶解，定容500ml。
3. 封闭液（3％BSA+CBS 或5％牛奶+CBS）：含3％牛血清白蛋白（BSA）：10mL CBS中加入0.3g BSA。含5％荷兰牛奶：10mL CBS中加入0.5g牛奶 。
4. 洗涤液（PBST 10*）：KH2PO4 4g，Na2HPO4·12H2O 58g，NaCl 160g， KCl 4g，Tween-20 10mL 加水定容2L。
5. 洗涤液(1*PBS)： PBST：H2O=1：9
6. 底物溶液（4甲基酰苯氨） ①TMB底物缓冲液(0.005mol/LPH3.6醋酸钠-柠檬酸缓冲液)：称NaAc·3H2O：1.13g，C6H8O7·H2O ：1.05g，用蒸馏水溶解，定容至1000mL，调PH=3.6。 ② TMB底物液：称3,3＇,5,5＇-四甲基联苯胺（TMB）0.08g 溶于40mL 二甲基亚砜（DMSO）中，加60 mL 甲醇，混匀，加100mL 底物缓冲液，在暗处避光搅拌2小时至溶解，4℃避光保存。 ③H2O2 底物液：取140μL过氧化氢（H2O2）加入200mL底物缓冲液混匀。 ④底物应用液：现用现配，TMB:H2O2=1:1混匀。
7. 终止液：2mol/L H2SO4
四、操作步骤
①抗原包被过夜（12h以上）： IgG抗原，用包被液（CBS）稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。 抗原用量：0.1μg*100N/抗原浓度 （N为板数）
②封闭：弃上清 加300μL/孔封闭液，37℃放置2h。
③洗涤：用洗涤液洗3次
④加一抗(待测样品为细胞培养上清)：将含单克降抗体的细胞培养上清100μL /孔加到已包被的板上，空白培养基作为阴性对照，已知样品血清（1：200稀释于1%BSA+PBST中）作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。 测免疫效价待测样品为小鼠血清时：采小鼠血液于常温20min左右后放4℃至析出血清，3000r 10min离心。将含抗体的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST连续倍比稀释(按照1：200开始)，100μL /孔。每个样品平行做两份，小鼠阴性血清或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。
⑤洗涤：用洗涤液洗5次。
⑥加二抗（酶标抗抗体）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBST l ：10000稀释，100μL／孔， 37℃恒温箱温育1h。
⑦洗涤：用洗涤液洗5次，
⑧显色：加新鲜配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒温箱放置10min，显示蓝色。
⑨终止反应、比色：加30μL/孔H2SO4终止液．颜色变黄；用酶标仪测定450nm 630nm处各孔的吸光值，阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。
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文献和实验乱弧菌所特有。凡能产生吲哚并还原硝酸盐为亚硝酸盐的细菌，均可呈现阳性反应。 三、碳源和氮源利用试验 1．枸橼酸盐利用试验 (1)原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。。 (2)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。 (3)结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基变蓝色为阳性；无菌落生长，培养基绿色为阴性。 (4)应用：可用此试验作细菌种属间鉴定。埃希菌属、志贺
产生少量溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。带有 pLacI 的宿主菌产生额外的抑制 pETBlue 和 pTriEx 载体基础表达的 lac 阻遏蛋白。 λ DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。 AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用
，使葡萄球菌落越远则感杆菌菌落越小，此称为卫星现象，有助于细菌的鉴定。一般分解葡萄糖产酸，不发酵乳糖。还原硝酸盐。有荚膜菌株产生吲哚。不溶血。产生自溶酶，可被胆汁溶解。一般主要有三种，即型特异性荚膜多糖抗原、型特异性菌体抗原和种特菌体抗原。 流感杆菌的抵抗力较弱。 50 ～ 55 ℃ 30 分钟被杀死。对一般消毒剂极敏感。在干燥痰中生存时间不超过 48 小时。 流感杆菌产生内毒素，在致病过程中起重要作用。无外毒素。多糖荚膜有抗吞噬作用。可产生 lga 蛋白酶，水解局部
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