MLE-12、MLE-12细胞、MLE12细胞、MLE12、

细胞介绍

该品系由 Kathryn A. Wikenheiser 于 1992 年在人类表面活性蛋白 C 基因启动子区控制下的 SV40 大 T 抗原转基因小鼠中建立。细胞在 6 到 9 个月裸鼠内产生肿瘤，肺表面活性蛋白 B、C (SP-B、SP-C)，细胞表达大 T 抗原的 mRNA。

检测到肺表面活性蛋白 B 和 C。细胞分泌磷脂以响应佛波酯和 ATP，但不响应毛喉素。

细胞特性

1） 来源：小鼠正常肺组织

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备DMEM/F12基础培养基                 (iCell-0005)                  94%

优质胎牛血清                                           （iCell-0500）                2%

GlutaMAX-1谷氨酰胺                               ( iCell-0900 )                 1%

HEPES 1M Buffer solution                        (iCell-01200)                 1%

P/S青霉素-链霉素                                （iCell-15140-122）            1%

ITS（胰岛素+转铁蛋白+硒）                       (iCell-4507)                   1%

氢化可的松                                                （iCell-8450）                10nM

雌二醇                                                          (iCell-8140）                10nM 

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

该细胞为轻微贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

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