- ￥350
- 信帆生物
- 国产
- XFP17096
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海信帆生物科技有限公司
- 规格：
100ml
该细胞裂解液可用于明胶酶谱试剂盒中的组织和细胞样本的裂解。
描述：
非变性细胞裂解液(Nondenaturing Lysis Buffer)内含非离子型去垢剂和盐，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合能力或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，在这种情况下，应该使用非变性细胞裂解液制备总蛋白。
储存：
4℃保存 12个月有效
规格：
100ml 500ml
操作步骤：
制备细胞裂解产物：
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积（PCV,106cells=~20ul, 107cells =~100ul PCV）；
2. 每50～100ul PCV加入5倍体积非变性组织细胞裂解液（250~500ul）,涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；
3. 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物，
制备组织裂解产物：
1. 取50-100mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
2. 加入0.5-1ml预冷的非变性组织细胞裂解液；
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；
4. 12000g4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物，可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot，明胶酶谱检测等实验。
注意：
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
3. 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择进行添加。
明胶酶谱试剂盒组织细胞样本裂解液
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文献和实验分析实验。 解决方案 1. 血液越新鲜越好，在血液收集管中使用 RNA 稳定试剂来保存 RNA。 2. 血液 RNA 提取本质上是白细胞 RNA 提取，使用 Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法回收单核细胞。 3. 去除抗凝剂和酶抑制剂。 4. 可采用专门用于血液样本的 RNA 提取试剂盒（如：QIAamp RNA Blood Mini Kit，货号：52304），其中含有高效的红细胞裂解液，在有效裂解细胞的同时也能防止其中释放出的大量 RNase 对后续 RNA 提取的影响。
发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
种属不能通用。常见待测样本类型有：血清、血浆、细胞上清、组织匀浆、细胞裂解液等。实验前，需要判断试剂盒能否满足目标物种的目标蛋白检测。 03 明确试剂盒的检测范围 试剂盒的检测范围即标准曲线范围。标准曲线范围不等同于样本浓度范围，所以，要特别注意判断待测样本浓度是否落在标准曲线范围内。对于浓度很高的样本，建议先通过预实验，摸索出合适的稀释倍数后，再大量测定样本。 04 明确试剂盒的国际质控标准 1 稀释线性 一般指样本稀释线性，即：将样本梯度稀释，看各稀释梯度浓度是否成线性；对于高浓度样本
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