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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 亚型:
IgG
- 形态:
液态/冻干粉
- 保存条件:
-20℃保存
- 克隆性:
多克隆
- 标记物:
FITC
- 宿主:
Rabbit
- 应用范围:
ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-4131 (石蜡切片需做抗原修复) not yet tested in other applications.
- 浓度:
3628mg/ml
- 抗体英文名:
SP6/KLF14
- 规格:
0.1ml 0.3633ml
【抗体的鉴定】
筛选杂交瘤细胞通过选择性培养而获得杂交细胞系中,仅少数能分泌针对免疫原的特异性抗体。一般在杂交瘤细胞布满孔底1/10面积时,即可开始检测特异性抗体,筛选出所需要的杂交瘤细胞系。
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同,选择不同的筛选方法,一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。
【抗体溶解方法】
方法1:我们的抗体(冻干粉)已经包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐剂(叠氮钠或庆大霉素),您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后,置于-20℃保存,最好分装后使用,避免反复冻融,可保证至少1年有效;
方法2:也可以只加入一半体积的双蒸水,再用一半体积的甘油补足,置于-20℃保存,这样抗体不会冻,有利于抗体的稳定。
后续试验时,再使用对应的缓冲液稀释成工作液,即用即配。
我们的抗体(冻干粉),在常温放置下,至少一个月有效;若在-20℃下保存(推荐),至少三年有效。
Antibodies are prepared with 0.01M PBS, pH 7.4 with 1% BSA and 0.1% Sodium Azide, prior to lyophilization. Currently, we offer both lyophilized and reconstituted antibodies, both resulting in final concentration of 1mg/mL. We recommend two ways to reconstitute antibodies in lyophilized form:
1) Reconstituting by directly adding 100uL of sterile, distilled water.
2) Alternatively, if glycerol does not affect the experiment, add 50uL sterile distilled water, followed by adding 50uL of glycerol.
修复液:0.01M 枸橼酸(pH6.0)或者0.05M EDTA(pH8.0)
【抗体修复方法】
方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;
方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
DAB溶液配制:(组化及Western blot 显色)
称DAB 30mg,用0.05mol/L pH7.6 Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀,过滤后使用,一般新鲜配制使用;
使用前加入1% H2O2 1ml至1.5ml,H2O2浓度为0.01%,混均后使用。7、3′,3′,5′,5′,-四甲基联苯胺(TMB)
【溶液配制】
用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或无水乙醇,将TMB配成1%浓度,4°C保存半年以内使用;
使用前,用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1% TMB溶液中,再按每毫升TMB加入30% H2O2 1ul,混匀后立即使用。2N H2SO4终止后,450nm测定OD值。
8、1%离子琼脂胶配制液
作免疫双相扩散,单相扩散及免疫电泳中使用。
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文献和实验基因表达调控的重点。现在的基因数据库信息丰富,拿到基因及其启动子序列非常简单。那么问题又来了,拿到启动子序列以后,下一步怎么找相关的调控蛋白/转录因子呢?生物信息学方法预测?你会得到很多可能的目标调控蛋白/转录因子,还要做实验一个一个验证。凝胶迁移(EMSA),染色质免疫共沉淀(ChIP)?只能针对已知能与启动子结合的调控蛋白/转录因子,而且还需要相应探针/抗体,对于大量筛选无能为力。美国Signosis的转录因子(结合启动子)微孔板芯片检测试剂可以方便、高效地解决这一问题。该方法专门用于筛查与特定DNA序列
原理: 将染色质和与之相互作用的转录因子和组蛋白通过甲醛等物质交联起来,然后通过超声将染色质打碎成小片段,加入针对特定转录因子或特殊修饰的组蛋白抗体,通过 Protein A/Protein G 微球或磁珠将抗体-转录因子-染色质复合物拖下来,通过 PCR 或测序的方法检测与目的蛋白相结合的 DNA 序列,进而研究这些转录因子在细胞发育或者生长中的作用位点。 ✦ ChIP-seq: ChIP-seq 将 ChIP 技术与二代测序相结合,将 ChIP 下来的 DNA 进行二代测序文库构建,能够获取
电极移动距离的大小是同其分子量的对数成反比。如果某种 DNA 分子结合上一种特殊的蛋白质,那么由于分子量的加大它在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞,于是朝正极移动的距离也就相应的缩短,因而在凝胶中出现滞后的条带,这就是凝胶阻滞实验的基本原理。 3. 过程: 首先制备细胞蛋白质提取物(理论上其中含有某种特殊的转录因子) 用放射性同位素标记待检测的 DNA 片段(含有转录因子的结合位点) 这种被标记的探针 DNA 同细胞蛋白质提取物一起进行温育,于是产生DNA -蛋白质复合物,在控制使 DNA -蛋白质保持结合状态
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