- ￥1800
- KAPA Biosystems
- 美国
- KK2502
- 2026年02月20日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
北京普凯瑞生物科技有限公司
- 规格：
1.25ml
KAPA HiFi高保真酶及Ready Mix
1、KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶，分热启动版和非热启动版，保真性强，活力超高。具有以下特点：
1）超高保真，通过大规模二代测序得出的出错率：2.8×10-7
2）可以扩增各种复杂模板；
3）扩增片段长，扩增基因组可达15kb，质粒DNA或噬菌体DNA可达18kb；
4）扩增速度快，节省75%以上的时间；
5）KAPA高保真热启动酶，含有2中buffer，分别用于常规模板和高难度模板。
2、应用
1）基因定点突变；2）测序；3）蛋白表达。
3、产品表现
1）超级保真、灵敏
2）扩增复杂模板————无可匹敌
3）退火温度对条带特异性的重要性
4、PCR反应
1）推荐反应体系
2）推荐反应参数
注意事项：
1）HiFi Buffer中盐离子浓度较高，影响DNA变性/退火，所以复杂模板需要较长的变性温度，5分钟；GC Buffer主要针对高GC或稳定二级结构的模板，仅当HiFi Buffer效果不佳时使用，但其会降低保真性；
2）每个循环中变性条件为：98℃20s；
3）最佳退火温度需通过梯度PCR优化得到；根据Tm值设定最低的退火温度，然后若要增加灵敏度可每次提高1℃，若要提高特异性每次降低1℃；
4）推荐延伸时间：30s/kb；若模板浓度高，可降低延伸时间，但较长的延伸时间会增加实验的灵敏度和产量；
5）推荐25个或更少的循环数，若起始模板浓度低或扩增效率偏低导致产量不高，可增加至30-35个循环；
6）该体系可扩增≥10kb的目的基因片段。若实验对MgCl2有特殊要求，请进行梯度试验，每次增加或减少0.25mM；
7）根据实验要求可调整HiFi酶的浓度，范围：0.25U-1.0U/25μl；
8）末端加A，HiFi高保真酶扩增产物是平末端，若要连接到T载体上，扩增产物纯化后用KAPA Taq DNA酶进行72℃延伸，因为未纯化的产物中含有HiFi酶，其校对活性影响加A效果。
5、问题及解决方案
6、产品信息
| 货号 | 产品 | 规格 |
| KK2101 | HiFi高保真酶（含dNTPs） | 100 units，200×25μl |
| KK2102 | HiFi高保真酶（含dNTPs） | 250 units，500×25μl |
| KK2501 | HiFi热启动高保真酶（含dNTPs） | 100 units，200×25μl |
| KK2502 | HiFi热启动高保真酶（含dNTPs） | 250 units，500×25μl |
| KK2601 | HiFi热启动高保真酶Ready Mix | 100×25μl |
| KK2602 | HiFi热启动高保真酶Ready Mix | 500×25μl |
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文献和实验结果并非如此。如果大家需要使用热启动酶，建议向厂商索取的检测数据（如分子信标法检测，Ma et al., Anal Biochem, 2006），以证明其确实具有热启能力。2. 保真性保真性就是扩增过程中的错配率，对于 cDNA 克隆、文库构建的老师来说是尤为重要的参数。Taq 酶的保真性较低，而 Pfu、HiFi 等高保真酶具有 3’-5’ proofreading 功能，可以校正错配，保真度较高。保真性高于 Taq 酶 50 倍左右是比较常见的数值。我们也可以用 Lac I 分析的经典方法自己检测一下
释放酶活；一类是抗体法修饰的热启动酶，如 Champagne Taq ，预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间，方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢？如果实验对保真度的需求不高，那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍，可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段，对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
含有这两种酶切位点序列。 已经开始进行ta克隆 如楼上战友所述，TA克隆的确是长片段亚克隆的好的手段。我最初开始学习构建质粒的时候也是先上TA，不过我们实验室一直使用一种KAPA HIFI readymix的酶，效果很好，保真性也非常非常高，就是做TA的时候比较麻烦，需要把PCR产物纯化回收后再加一次A tail，而就是这一步我感觉一直没有摸索到最优化稳定的条件，所以每次加A后连pCR2.1 转化的结果都不稳定，有时候长的多有时候长得少，之前曾经就这个问题发帖
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