手机验证
询价列表
暂时没有已询价产品
微信扫一扫分享
分享到新浪微博
分享到丁香园论坛
KAPA HiFi高保真酶及R
企业认证
点击 QQ 联系
北京普凯瑞生物科技有限公司
100U
KAPA HiFi高保真酶及Ready Mix
1、KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶,分热启动版和非热启动版,保真性强,活力超高。具有以下特点:
1)超高保真,通过大规模二代测序得出的出错率:2.8×10-7
2)可以扩增各种复杂模板;
3)扩增片段长,扩增基因组可达15kb,质粒DNA或噬菌体DNA可达18kb;
4)扩增速度快,节省75%以上的时间;
5)KAPA高保真热启动酶,含有2中buffer,分别用于常规模板和高难度模板。
2、应用
1)基因定点突变;2)测序;3)蛋白表达。
3、产品表现
1)超级保真、灵敏
2)扩增复杂模板————无可匹敌
3)退火温度对条带特异性的重要性
4、PCR反应
1)推荐反应体系
2)推荐反应参数
注意事项:
1)HiFi Buffer中盐离子浓度较高,影响DNA变性/退火,所以复杂模板需要较长的变性温度,5分钟;GC Buffer主要针对高GC或稳定二级结构的模板,仅当HiFi Buffer效果不佳时使用,但其会降低保真性;
2)每个循环中变性条件为:98℃20s;
3)最佳退火温度需通过梯度PCR优化得到;根据Tm值设定最低的退火温度,然后若要增加灵敏度可每次提高1℃,若要提高特异性每次降低1℃;
4)推荐延伸时间:30s/kb;若模板浓度高,可降低延伸时间,但较长的延伸时间会增加实验的灵敏度和产量;
5)推荐25个或更少的循环数,若起始模板浓度低或扩增效率偏低导致产量不高,可增加至30-35个循环;
6)该体系可扩增≥10kb的目的基因片段。若实验对MgCl2有特殊要求,请进行梯度试验,每次增加或减少0.25mM;
7)根据实验要求可调整HiFi酶的浓度,范围:0.25U-1.0U/25μl;
8)末端加A,HiFi高保真酶扩增产物是平末端,若要连接到T载体上,扩增产物纯化后用KAPA Taq DNA酶进行72℃延伸,因为未纯化的产物中含有HiFi酶,其校对活性影响加A效果。
5、问题及解决方案
6、产品信息
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
马上登录 或注册,即可保存询价历史