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SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
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2~8℃
长期
大量
康朗生物
50次
● 产品组成:名称 规格 保存条件
30%PAA(29:1) 100 ml 4℃
1M Tris pH8.8 100 ml RT
1M Tris pH6.8 15 ml RT
10% SDS 5 ml RT
APS(干粉) 0.5 g RT
TEMED 0.5 ml 4℃,避光
说明书 一份
● 产品简介:
本公司提供的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。
● 使用说明:一 配制分离胶(各试剂使用量请参考表二)
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度(表一),再按照下面的分离胶配方表(表二)配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
6% 50-150kD
8% 30-90kD
10% 20-80kD
12% 12-60kD
15% 10-40kD
配制分离胶前,根据以下配方准备10% APS:10% APS配制-5 ml:将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
制备分离胶步骤:1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
2.根据表二,将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合;先后加入TEMED和10%APS,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡
3.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。
4.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。
注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二 浓缩胶制备:1.去除覆盖在分离胶上的水层。
2.按照表三将不同成分在一个小烧杯或试管中混合;先后加入TEMED和10%过硫酸铵,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
3.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
5.静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。
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