超滤浓缩管（Nanosep、Nanosep MF、Micro

菌落原位杂交

-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。 　　(8) 把滤膜放在纸巾上于室温晾干后,把滤膜(编号面朝上)放在一张保鲜膜上,并在保鲜膜上作几个不对称的标记,以使滤膜与放射性自显影片位置对应。 　　(9) 用第二张保鲜膜盖住滤膜。加X光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。 　　(10) 底片显影后,在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置,同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸,通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定

Northern blot实验步骤

带型，由许多长度范围从500碱基以下至5kb以上的各种mRNA共同组成，mRNA的平均长度约为2kb。四、杂交和放射自显影固定于滤膜上的RNA的预杂交、杂胶及淋洗等条件，与DNA杂交的相应条件基本相同。现简述如下：1、用下列两种溶液之一进行预杂交，时间1-2小时。若于42℃进行，应采用：50%甲酰胺5xSSPE2xDenhardt试剂0.1%SDS若于68℃进行，应采用：6xSSC2xDenhardt试剂0.1%SDS2、在预杂交液中加入变性的放射性标记探针，如欲检测低丰度mRNA， 所用探针的量

Northern blot技术

）、0.04％亚甲蓝溶液中， 于室温浸泡５－１０分钟。 （3）用水淋洗滤膜５－１０分钟后，可见ＲＮＡ分子量标准参照物带型锐利而poly(A)+mRNA为一模糊带型，由许多长度范围从500碱基以下至５kb以上的各种mＲＮＡ共同组成，mＲＮＡ的平均长度约为２kb。 杂交和放射自显影 固定于滤膜上的RNA的预杂交、杂胶及淋洗等条件，与DNA杂交的相应条件基本相同。现简述如下 （1）用下列两种溶液之一进行预杂交，时间1－2小时。若于42℃进行，应采用。 50％甲酰胺 5xSSPE