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- 文献和实验
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上海研谨生物科技有限公司
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大量存货
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5个/包
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文献和实验实验目的 掌握凝胶层析的基本原理。 学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实验技能。 实验原理 凝胶层析法也称分子筛层析法,是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。当混合物随流动相经过凝胶层析柱时,其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高。 凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质,每个颗粒的细微结构及筛孔的直径
板置于显微镜下。在不破坏单层细胞的情况下,用移液器吸头轻轻移出自由漂浮的球体,并将其转移到 1.5ml 的离心管中。让球状体在离心管底部沉降 5-10 min,必要情况下可以用微量离心机低速离心 10s。 9、将吸出的球体接种于 200μl 含蛋白浓度 8.0mg/ml 的 Matrigel 胶中,轻轻吹打混匀,迅速操作并防止气泡产生。 10、在 24 孔板的每个培养孔中心接种 25μl 混合液,放入 37℃ 培养箱中静置 10min。待 Matrigel 凝固后,加入 0.5ml hLOs
液在 QIA shredder 离心柱上离心2min (以除去细胞壁和沉淀); (f)将溶液转移至另一干净的2ml Eppendorf 管中,弃去沉淀; (g)加入0.5倍体积的 AP 3溶液,混匀。为了避免氯化物的生成,不要将 AP 3溶液与次氯酸钠混合。加入1倍体积的无水酒精,混匀; (h)将溶液放在 DNeasy minispin 柱上,10000×g离心1min (使DNA 附着在层析柱上)。柱子的最大容积为650μl ,此步骤可重复若干次; (i)将柱子放置于新的2ml
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