Supor 200 PES圆盘过滤膜片，网格，0.2 µm，

2×CTAB法植物总DNA提取

.用琼脂糖凝胶检测结果。 11. -20℃—— -70℃低温保存。   去除总DNA中的 RNA污染 先做预扩增实验，若RNE污染无严重影响则舍去该步骤 A 1.  在总DNA溶液中加入灭菌去离子水或者TE溶液调整总体积至200µl, 加入10µ RNase-A（10mg/ml）4℃过夜，或者37℃ 1h . 2. 用等体积的24：1抽提。 3. 沉淀DNA——洗涤DNA——干燥DNA­——溶解

人APC和TSC－2 cDNA的长5＇RACE

30s，接着40个循环的94℃ 15 s，65℃ 20 s，68℃ 5 min]，其中使用了1单位的ELONGASE酶混合物[PCR 50ml终体积，其中60 mM Tris－SO4（pH9.1），18 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4，dNTP每个200 µM，引物每个400 nM ]，其中分别是AAP和引物TSC－2－2826（A带）或引物TSC－2－1732（B带）一起使用。每个PCR产物（带1和带3）取10µl 在0.8％琼脂糖上，1倍TAE凝胶电泳和SYBRò绿染色（分子

质粒的提取和制备

溶液配制（一）LB培养基每1000 ml加分析纯NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，用ddH2O配制，再用10 M NaOH调pH至7.4（100 ml一般加450 μl），高温高压蒸汽灭菌15 min冷却后使用。固体培养基加入琼脂1.5%。10 M（或N）NaOH配制方法是称200 g NaOH加300 ml，搅拌充分溶解后定容至500 ml。（二）溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ溶液Ⅰ：葡萄糖50 mmol/L，EDTA 10 mmol/L，Tris-HCl 25 mmol/L，pH