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- 文献和实验
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上海研谨生物科技有限公司
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大量存货
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10个/包
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文献和实验去除方法是基于白蛋白和 Cibachron 蓝色染料的结合。AlbuminOUT™被优化从样本中去除人的白蛋白。AlbuminOUT™使用快速离心柱方法,每个柱子含有 0.2 ml 的染料结合树脂,从而可以结合大于 2 mg 的人白蛋白。AlbuminOUT™可以从 5-50 微升人血浆中去除大于 98% 的白蛋白。 离心柱形式可以在 10 分钟内去除白蛋白。高结合力的蓝色染料结合树脂可以从人,猪,羊,狗,兔,大鼠和牛样本中达到瞬间的结合和去除白蛋白。AlbuminOUT™或许
压下尽快进行(要快速建立真空且持续时间不要过长,否则,过滤板就会过于渗漏)。 ( 6 ) 另一个高通量纯化蛋白质的方法就是应用 Qiagen BioRobot 8000 和 Ni-NTA Superflow 96 BioRobotKit (Qiagen) 系统 [14],使用与手工纯化相同的缓冲液来裂解、冲洗和洗脱 (见 28.2.1)。与手工纯化方法相比,机器自动纯化方法的劣势就是实验药品消耗较大,以及洗脱体积无法调节到低于 350 μl。用手工纯化方法,洗脱体积可从 30~80 μl
下来。根据被转移的蛋白分子量大小,要选择不同孔径的硝酸纤维素膜。因为随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量蛋白的结合就越 牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm,蛋白的转移就很难进行了。因此,我们通常用0.45μm和0.2μm两种规格的硝酸纤维素膜。大于20kD的蛋白就 可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了,如果用0.45μm的膜就会发生“Blowthroμgh”的现象。从膜的质地上来 看,最重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度
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