Rosseta(DE3)感受态细胞 克隆与表达

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

Rosseta(DE3)感受态细胞 克隆与表达是高品质的克隆与表达，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Rosseta(DE3)感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：Rosseta(DE3)感受态细胞 克隆与表达
英文名：Rosetta(DE3) Competent Cell
产地：国产|进口
规格：10×100μl
品牌：百奥莱博
本品是在具有大肠杆菌BL21菌株基础上制备的化学转化感受态细胞，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA）对应的tRNA，提供外源基因（尤其是真核基因）在原核系统中的表达水平。经pUC19质粒检测，转化效率可达10^7 cfu/μg。本品具有氯霉素抗性。

注意事项

1）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用，避免反复冻融。
2）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
3）为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）本品应于-80℃保存，请勿将感受态细胞储存于-20℃或液氮中保存。
5）整个转化过程请于无菌条件下操作。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
① 通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和；
② 待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
3）42℃水浴，不要晃动，准确热激45s后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。
4）向离心管中加入900 μl 不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。
5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
6）取适量已转化细胞，加到含相应抗生素的固体培养基上，轻轻涂匀。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。
【注】：如菌体量较少，也可2,500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。
7）室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

储存条件：-80℃

更多有关Rosseta(DE3)感受态细胞 克隆与表达的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：
BL0791 大鼠IgG抗原(干粉)
BL1364 5×RNA Loading Buffer(非变性)
ARB12404 大鼠组织因子途径抑制物(TFPI)尿液中含量检测 Rat tissue factor pathway inhibitor,tfpi ELISA KIT
BTN131125 辣根过氧化物酶,偶联级 Horseradish Peroxidase,Conjugation Grade
ARB11168 人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)含量检测 Human herpes simplexvirus Ⅱ antibody,hsvⅡ-ab ELISA KIT
ARB13739 兔基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量分析 Rabbit matrix metalloproteinase,mmp-3 ELISA KIT
100684-32-0 肌球蛋白(肌红蛋白) Myoglobin
ARB11479 人胰高血糖素(GC)elisa检测说明书 Human glucagon,gc ELISA KIT
PY02-119 氯化钠三糖铁琼脂 250克
103476-89-7 Leupeptin 亮抑酶肽
ARB13868 猪白介素12(IL-12/P40)酶免分析 Porcine interleukin 12,IL-12/p40 ELISA KIT
002003 无菌脱纤维牛血 100ml|500ml
ARB12717 大鼠髓过氧化物酶(MPO)免费代测 Rat myeloperoxidase,mpo ELISA KIT
RN1201 PLANTeasy 植物RNA提取试剂
PY02-383 乳糖亚硫酸盐培养基 250克
ARB10447 人甲基化酶(MethylAse)含量测试 Human methylase ELISA KIT
ARB14031 植物维生素B12(VB12)尿液中含量检测 Plant vitamin b12,vb12 ELISA KIT
PY02-040 SCDLP液体培养基 250克
1400-61-9 Nystatin 制霉菌素
2′-脱氧胸苷-5′-单磷酸二钠盐 DNA 33430-62-5
直接黑BN Cerium carbonate hydrate 1937-37-7
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·GLI-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0082
英文名称：GLI luciferase reporter plasmid
规格：1μg
GLI荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（GL1 luciferase reporter plasimd）是用于检测GLI转录活性水平为目的的报告基因。GLI是Hedgehog(HH)通路直接调控靶基因的转录因子，是该通路不同水平激活的最后共同通道，在致瘤过程中起着重要作用。HH信号通路参与胚胎发育、成人组织再生及修复，且在肿瘤细胞生长及转移过程中发挥重要作用。已有大量研究证实该信号通路的异常激活与多种肿瘤的发生发展密切相关。

GLI报告基因主要用于检测细胞中Sonic hedgehog信号通路活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMGLI-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个GLI结合位点，可以高灵敏度地检测GLI的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得GLI报告基因更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMGLI-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。


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·细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
编号：SY0326
英文名称：Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
规格：50T
细胞核蛋白、细胞浆蛋白在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义，因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离。本试剂盒提供了一种较为简单方便，高效的蛋白抽提方法，其原理是：通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂C抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒1次可对2×106个细胞和30-50mg组织样品进行抽提，按照该使用量，SY0326可抽提50个样品。

产品组份：
胞浆蛋白抽提试剂A————10ml
胞浆蛋白抽提试剂B————0.5ml
胞核蛋白抽提试剂————2.5ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

使用方法
将试剂盒各组分溶解后立即放置在冰上，混匀。取适量的胞浆蛋白抽提试剂A（以下统称：试剂A）和胞核蛋白抽提试剂（以下统称：试剂C）备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

1 细胞样品蛋白的抽提
1）细胞处理
对于贴壁细胞：PBS清洗细胞1次，EDTA溶液消化细胞或用细胞刮子刮下细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，PBS清洗细胞1次，收集细胞，尽量吸尽上清，留细胞沉淀备用。
2） 每20µl细胞沉淀加入200µl含PMSF的试剂A。
【注】：对于2×106个Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20µl或40mg。
3） 最高速剧烈涡旋5s，完全悬浮分散细胞沉淀。
【注】：如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长旋涡震荡的时间。
4） 冰浴10-15min。
5） 加入胞浆蛋白抽提试剂B（以下统称：试剂B） 10µl。最高速剧烈涡旋5s，冰浴1min。
6） 最高速剧涡旋5s，4℃12,000-16,000g离心5min。
7） 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存备用。
【注】：此步千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免吸到沉淀。
8） 对于沉淀，完全吸尽残余上清，加入50µl含PMSF的试剂C。
【注】：此步需完全吸尽上清，否则会带来细胞浆蛋白的污染。
9） 最高速剧烈涡旋15-30s，把沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2min再高速剧烈涡旋15-30s，共30min。10）4℃ 12,000-16,000g离心10min。
11）立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存备用。

2 组织样品的抽提
1） 将组织切成非常细小的碎片。根据后续使用量按照20:1的比例混合试剂A和B，并加入PMSF至最终浓度为1mM，混匀即可配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。
【注】：匀浆需在冰浴或4℃进行。
2） 匀浆后将匀浆液转移至塑料离心管内，冰浴放置15min。
3） 4℃ 1,500g离心5min。把上清转移至一预冷的塑料管中，上清含部分细胞浆蛋白。
【注】：吸上清时千万不要触及沉淀。
4） 对于上述收集得到的沉淀，已经充分匀浆，但很多细胞仍没有破碎。接下来请参照【细胞样品蛋白抽提】的步骤2）开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，即可得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤【组织样品抽提】中步骤3）抽提得到的细胞浆蛋白合并备用。

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