组织/细胞线粒体分离试剂盒

组织/细胞线粒体分离试剂盒

规格：50T
英文名：Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue
线粒体是绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器，是细胞的动力工厂，细胞进行氧化磷酸化的场所。因此，对线粒体进行分离，以此为对象，对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。

本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体，获得的线粒体纯度较高，且绝大部分都含有完整的内膜和外膜，可用于线粒体的生理功能等方面的研究，得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白，从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。

按照每个样品使用量（细胞1-5×107个；组织：100-200 mg），本试剂盒可分别进行50个个样品的抽提。

试剂盒组份：
试剂A：100ml
试剂B：50ml
试剂C：1ml

储存条件：-20℃，有效期1年。

使用方法

1 线粒体的抽提
1）样本处理
① 组织匀浆：称取100-200 mg新鲜组织，PBS或生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5mL冰预冷的试剂A，混匀，孵育8-10min，匀浆10-30下左右，也可采用超声方法破膜。
② 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 g 离心5-10 min收集细胞。计数，每次提取需要1-5×107个细胞，加入1-2.5mL预冷的试剂A，重悬细胞，混匀，孵育8-10min，可以采用超声或匀浆器方法破膜。
2）将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4 ºC，800 g 离心5 min。
【注】：细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。
3）收集上清液并转移到新的离心管。4 ºC，800 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4）将上清液转移到新的离心管。4 ºC，12,000×g 离心10 min，小心去除上清，沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
【注】：离心后的上清含胞浆成分，尽量除去上清。

2 线粒体蛋白的抽提
1）向每毫升预冷试剂B加入10μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。
2）按每10μL线粒体压积中，加入100μL上述配制好的试剂B/C溶液。
3）置于4℃旋涡振荡15-30 min 。
4）10,000rpm，4℃离心15min，取上清，即为线粒体全蛋白提取物，进行蛋白定量。
5）分装保存于-70℃，避免反复冻融。