北京His标签蛋白纯化预装柱现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售北京His标签蛋白纯化预装柱现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京His标签蛋白纯化预装柱现货
规格：5ml|1ml
产地：国产|进口
编号：SY0394
品牌：百奥莱博
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户用于纯化His-tag蛋白。

基质（Matrix）：高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压（Tolerance Pressuremax）：0.3MPa, 3bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸（Column Size）：0.7×2.5cm（1ml）
储存条件：4℃保存，有效期2年

注意事项
1）建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
（一）纯化流程

1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达蛋白为例）
1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液，10000rpm，4℃离心20-30min。取上清，0.22µm/0.45µm滤膜过滤后，置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶，5000rpm离心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）
1）将培养液转移至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体去上清。
2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。
3）将破碎液转移至离心管，10000rpm，4℃离心20-30min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。
4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。
5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 样品纯化（以AKTA使用为例）
1）将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞，连接至色谱系统中，再折断下口，将预装柱连接到色谱系统中，注意旋紧。
2）3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4）利用泵或注射器上样。【注】：若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。【注】：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7）建议用更高浓度咪唑（如500mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni2+脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液，接触时间为1-2h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa），填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：
1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱体积；
2）去离子水清洗5倍柱体积；
3）2%SDS清洗3倍柱体积；
4）去离子水清洗5倍柱体积；
5）乙醇清洗5倍柱体积；
6）去离子水清洗5倍柱体积；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱体积；
8）去离子水清洗5倍柱体积；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱体积；
10）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

更多有关北京His标签蛋白纯化预装柱现货的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·LXRE-Luc报告基因质粒
编号：SY0131
英文名称：LXRE Luciferase Reporter Plasmid
规格：1μg
LXRE-Luc报告基因质粒（LXRE luciferase reporter plasmid）是用于检测LXRE转录活性水平为目的的报告基因。LXR（liver X receptor）是核受体转录因子家族的成员之一，它与PPARs、FXR和RXR有着密切的关系。LXR对胆固醇、脂肪酸和葡萄糖稳态有着重要的调节作用。

LXRE-Luc报告基因质粒主要应用于Liver X Receptor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMLXRE-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个LXRE结合位点，可以高灵敏度地检测LXRE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得LXRE报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



使用说明
pGMLXRE-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


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·激动素
编号：SY0622
英文名称：Kinetin
规格：500mg
激动素（Kinetin），又称6-糠基氨基嘌呤（6-Furfurylaminopurine），是一种腺嘌呤类植物细胞分裂素，可与其他植物生长素，如indole-3-acetic acid (IAA), indole-3-butyric acid (IBA), 1-napthaleneacetic acid (NAA)等联合使用用于植物细胞培养，主要起到诱发愈伤组织，以及促使愈伤组织到植物组织的再生作用。

中文别名：6-糠基氨基嘌呤；N6-呋喃甲基腺嘌呤
英文别名：6-Furfurylaminopurine; N6-Furfuryladenine
CAS：525-79-1
分子式：C10H9N5O
分子量：215.2
熔点：269 - 271℃
外观：白色结晶
纯度：>98%
溶解性：溶于稀盐酸或稀碱溶液，微溶于冷水、乙醇
储存条件：-20℃，有效期三年
结构式：



北京His标签蛋白纯化预装柱现货关键词：His标签蛋白纯化预装柱,SY0394,Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML

五肽胃泌素 Hot Taq DNA Polymerase 5534-95-2
ARB11135 人肽聚糖(PG)elisa检测操作说明书 Human peptidoglycan,pg ELISA KIT
乙酸甲脒 DOX 3473-63-0
BFD011 猪流行性腹泻病毒抗体检测试剂盒
BL1179 亲和层析柱1ml
BTN70906 NTP溶液,10mM NTP Solution,10 mM
79-14-1 羟基乙酸 glycolic acid
BTN130601 DNA修复混合液 DNA Repair Mix
ARB12320 大鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)含量检测 Rat low-density lipoprotein-receptor-related protein,lrp-1 ELISA KIT
BTN80701 TG1感受态细胞 TG1 Competent Cell
5-羟基吲哚乙酸 HEPBS 54-16-0
ARB12648 大鼠酪氨酸激酶B(TrkB)Elisa方法检测 Rat tyrosine kinase b,trk b ELISA KIT
CYB162014 兔抗猪IgG(抗血清) 0.5ml

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