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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
? 或许您在凝胶上看到了不应该出现的条带。这些额外的条带可能是非特异性扩增的一个例子(见图 1)。为了实现特定目标条带的高产率扩增,请选择热启动 DNA 聚合酶。只有当初始变性步骤达到 90°C 时,热启动 DNA 聚合酶才开始扩增。此功能有助于确保 PCR 反应不过早引发,得到不想要的非目标产物。此功能还有助于防止引物二聚体的形成,这在多重 PCR 和高通量 PCR 分析时特别有用。 用于高特异性和高通量应用的 DNA 聚合酶的推荐您选择 Invitrogen Platnium 热启动 DNA 聚合
,切除标签,并通过质谱仪检测。如果你们实验室没有质谱仪,而又想开展多重分析,那么下面的一些方案可能适合你。 罗氏应用科学部的Light Cycler 480 Probes Master Mix能成功支持4重反应,甚至达到5重。这是一种即用型的反应预混液,包含了FastStart Taq 热启动型DNA聚合酶,它能减少非特异产物的形成,从而显著改善PCR的特异性和灵敏度。 Bio-Rad的iQ Multiplex Powermix能检测最多4个目标,即使它们的表达量相差106倍
和台面上残留的 DNA 和 RNA。 试剂组分的污染 按照标准 PCR 实验室的分区要求,在清洁度最高的「试剂储存和准备区」进行试剂的制备、分装和预混液的制备。大包装的 qPCR 试剂开封后进行分装,以减少反复冻融和吸取次数。在做多样本 PCR 反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,最后加入样本核酸。避免同时开盖,实现完全闭管操作。实验试剂应与样品和 PCR 产物分开保存,不应放于同处。 前次 PCR 扩增产物和引物残余污染 标准的 PCR 实验室分区通过「标本制备区
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