SsoAdvanced 通用探针预混液，5000x20ul

microRNA 研究实验导航—定量分析

盒中的酶预混液及buffer就可以开始热循环了。正反引物中有一条是特异性的miRNA引物，针对人、小鼠、大鼠、病毒95%以上miRNA的特异性引物QIAGEN已经设计好了，免去你自己设计优化的烦恼，可以通过他们的网站www.qiagen.com/GeneGlobe查询定购；另一条引物是通用的引物，包含在real-time PCR试剂盒里面。如果你还想检测其他小RNA或是mRNA的表达水平，只需加入相应的扩增引物就行，可谓一款试剂多种用途。为了方便刚刚开始进行miRNA研究的工作者，QIAGEN特别

凝胶迁移实验（EMSA）实验方法

。 （3）探针制备 根据实验要求设计不同的探针并添加标记，可以合成核酸后自行添加，部分已知蛋白有商业化的抗体也可以直接购买。现在大多数实验室已经不再使用放射性标记，生物素使用相对较多。 2、形成蛋白-探针复合物 （1）在0.5ml离心管中按顺序将下列组份混匀： 蛋白样本（2-5μg） Xμl poly d(I-C) 1μl Binding

电泳迁移实验 EMSA

后，于40 ℃ ,15 000g 离心15min, 上清为核蛋白。⑥取2μl 核蛋白Bradford 法测定核蛋白浓度，分装后于-70 ℃ 保存。2. 探针的标记与纯化A 、探针的标记: 将以下试剂加入冰浴中的0.5m l 的EP 管中，总体积20 时。①未标记的探针:2μl (50ng); ② 10 x 激酶缓冲液:2g 1; ③ [y-32P]ATP: 4μl (40 uCi); ④T4 多聚核甘酸激酶:lμl (10U); ⑤超纯水:11μl 。B. 混匀后37 ℃ 水浴30 分钟;C 、加入5μ