QPCR样品制备试剂，100个反应

荧光定量 FAQ 专题—前期准备

充分的准备是实验成功的关键，那么，qPCR 实验需要提前做好哪些了解呢？ 试剂的储存条件 市面上大多数 qPCR 试剂推荐 - 20 ℃ 避光长期储存。 Vazyme 的 ChamQTM 和 AceQ® 两个系列的 qPCR Master Mix，长期储存应置于 - 20 ℃ 避光，解冻后可于 4 ℃ 短暂存放；避免反复冻融。 原始模版稀释倍数 尽量选择 Ct 值落在 15 - 28 范围的稀释倍数作为原始模板稀释度。 反应体系与次数 推荐 20 μl 体系，Vazyme

Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手

方程： 从线性方程上看，斜率（slope）为 -1/lg(1+E)，所以 E = 10-1/slope-1。如果从标准曲线上得到斜率（-3.3），就可以算出扩增效率（0.99）。一般来讲PCR扩增效率在 90%-110% 都是可以用于数据分析的。效率低于 100%，是由于 PCR 反应中存在抑制因素；而高于 100% 可能一些污染、非特异性扩增或者是引物二聚体造成。 3. Real-time qPCR 的种类 根据 real-time qPCR 的化学发光原理可以分为2大类：一类为探针类，包括

学会这 8 个qPCR 操作，每天都有阳性 data ！

了时间精力，又浪费了你的感情。并且为了保证引物的特异性，在使用一个新的引物之前，要跑一个琼脂糖凝胶电泳，观察一下条带是否是单一的，是否有引物二聚体。 手法要细致：RT-qPCR 灵敏度高，对加样的精度和准度要求都比较高，因此在拥有一把精准的枪的基础上，我们要保证每次加样前，移液枪与枪头要连接紧密。移液枪与枪头如果连接松散，会影响精准度，吸上来的液体可能并不是我们想要的。每加一个样换一个枪头。 反应体系需讲究：在我们配置RT-qPCR反应体系时，一定要先加量大的试剂，然后再加入量较小的试剂