IQ系列定量PCR仪FAM荧光校正染料

qPCR常见问题及其分析

PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束

定量PCR常见问题解答

实验室配备除湿机。 　　空间：易于操作，安全。  7、怎样判断定量PCR仪的样本加热块是否被污染？怎样清除污染？  一个办法是运行背景校正反应板，当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号，则表明该孔可能被荧光污染物。另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下，执行ROI的校正，当某个孔的信号明显高出其他孔时，则表明该孔被污染。 清除样本加热块污染的步骤如下 用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中。 　　吹打数次。 　　将废液吸入废液杯中。 　　重复以上步骤：乙醇三次，去离子

Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手

操作。 3. 每管或每孔都要换新枪头！不要连续用同一个枪头加样！ 4. 所有成分加完后，离心去除气泡。 5. 每个样品至少 3 个平行孔。 参比或者校正染料（reference dye，passive dye）常用的是 ROXTM （现在已经是ABI的注册商标了！）或者其他染料，只要不影响检测 PCR 产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非 PCR 震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把 ROXTM 配制在 MasterMix