Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L) 二

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北京百奥莱博专业生产销售Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L) 二抗，我公司供应的抗体抗原品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L) 二抗
编号：YT860
英文名：Alexa Fluor 555-labeled Donkey Anti-Rabbit IgG(H+L)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：0.1ml
本Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L)用于免疫荧光染色。

Alexa Fluor 555是一种常用的非常明亮的红色荧光探针。它比绝大部分常用的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。Alexa Fluor 555的荧光光谱和Cy3非常接近。Alexa Fluor 555的吸收峰555nm，发射峰565nm。

本抗体为用纯化的兔IgG免疫驴，然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化，并经过人IgG、小鼠IgG和大鼠IgG吸附纯化的优质二抗。

本Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例，推荐的调节范围为1:200-1000。

本抗体如果用于常规的免疫染色，以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计，至少可以检测50次。如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗，至少可以多检测150-250次。

储存条件：-20℃，有效期一年。

Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L) 二抗极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：
ARB12489 大鼠总胆固醇(TC)含量测试 Rat total cholesterol,tc ELISA KIT
73049-73-7 胰蛋白胨 Tryptone
BTN130587 小鼠抗E2标签单抗 Anti E2-Tag Mouse Mab
SJ0328 GMP Na2 5"-单磷酸鸟苷二钠盐水合物
F030610 FITC标记山羊抗小鼠IgM抗体 Goat Anti-Mouse IgM*FITC
ARB12438 大鼠骨保护素(OPG)ELISA检测服务 Rat osteoprotegerin,opg ELISA KIT
BL0184 考马斯亮蓝 Coomassie brilliant blue R-350
ARB10018 人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)酶免分析 Human 28s ribosome rnp antibody,28s rrnp ELISA KIT
CBZ-D-天冬氨酸 Poly I 78663-07-7
甘油磷酸钙 L(-)-Camphorsulfonic acid 58409-70-4
BL1372 通用RT-PCR试剂盒(AMV)
α-甘油磷酸脱氢酶-磷酸丙糖异构酶 Tween 40
BTN100844 PCR优化试剂盒 PCR Optimization Kit
BTN120414 DNA拓扑异构酶I DNA Topoisomerase I
A0301 优级新生牛血清(无菌采制)
F040305 猪IgG抗原 Pig IgG
BTN101002 KOD DNA聚合酶 KOD DNA Polymerase
7791-18-6 Magnesium chloride hexahydrate 氯化镁六水
PY02-031 蛋白胨水培养基 250克
BFD077 犬瘟热抗原快速检测卡
Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L) 二抗关键词：Alexa Fluor 555标记抗兔IgG(H+L)二抗,兔IgG(H+L)抗体,Alexa Fluor 555标记二抗,驴抗兔二抗

ARB12166 大鼠白介素2受体(IL-2R)elisa测定使用说明书 Rat interleukin-2 receptor,IL-2r ELISA KIT
L-苯甘氨酸 Dicofol 2935-35-5
F030503 FITC标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*FITC
辛二酸 Fmoc-Thr-OH 505-48-6
BTN120407 S1核酸酶 S1 Nuclease
BTN90318 柱式DNA清除剂 Column DNA Erasol
ARB13850 猪内皮素1(ET-1)含量分析 Porcine endothelin 1,et-1 ELISA KIT
477-73-6 Safranin O 番红O
PY02-338 改良CCD(mCCD)琼脂基础 250克
C1501 狗血清(无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
BL1403 固相RNase清除剂
ARB14038 植物维生素K1(VK1)酶联免疫定量检测 Plant vitamin k1,vk1 ELISA KIT
N-乙酰-L-蛋氨酸 N-(r-L-Glutamyl)-1-naphthylamide 65-82-7
ARB11635 人淋巴细胞抗原6复合物基因座A(Ly6A)Elisa分析 Human lymphocyte antigen 6 complex locus a,ly6a ELISA KIT
BL1331 通用引物 27F
BL1269 0.01M PBS(干粉) PH7.2-7.4
Alexa Fluor 555标记驴抗兔IgG(H+L) 二抗关键词：Alexa Fluor 555标记抗兔IgG(H+L)二抗,兔IgG(H+L)抗体,Alexa Fluor 555标记二抗,驴抗兔二抗


·基因定点突变试剂盒
编号：YT027
英文名称：Site-directed Gene Mutagenesis Kit
规格：10次
本试剂盒可以用于点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。

本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通过基于PCR的突变质粒的合成，和基于Dpn I的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒(参考图1)。累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。



参考上图，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌，在细菌中会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用甲基化酶Dpn I处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。

本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。

试剂盒组份：

Pfu DNA Polymerase	10μl
Reaction Buffer(10X)	100μl
dNTP Mix(2.5mM each)	50μl
Dpn I	10μl
DH5α 甘油菌	200μl
Nuclease-Free Water	1ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

使用说明：

1. 引物设计：
用于特定基因突变的引物需要单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计：
(1) 共需设计两条互补的引物。可以先集中设计一条，然后就可以得到互补的另一条引物。
(2) 引物的长度通常为25-45个碱基。
(3) 引物中突变位点任何一侧都必需满足 4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数) ≥45。但引物也不宜过长，否则通常会形成非常稳定的二级结构。通常把突变位点两侧的碱基数控制在15个左右，且使两侧按照上述计算得到的数值相近。
例如引物为agtcaggccaattcgaagcagtcgaattgccaag，其中蓝色的aag为突变位点，则
左侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X7＝46≥45
右侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X8＝48≥45
(4) 在可能的情况下，尽量把引物的GC含量控制在40％-60％。
(5) 在可能的情况下，尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。二级结构和二聚体可以通过一些软件进行分析。
(6) 最好使用经过PAGE纯化的引物或更高纯度的引物。

2. 引物的配制：
如果合成得到的一个引物A的量是20nmol，另外一个互补引物B的量是19nmol。在引物A中加入200微升水，配制成浓度为100µM，在引物B中加入190微升水也配制成浓度为100µM。吸取20微升100µM引物A和20微升100µM引物B到一新的离心管中，再加入160微升水，混匀后即可得到可以直接用于基因定点突变反应的引物(10µM each)。

3. 待突变模板质粒的选择：
选择GC含量在40-55％的待突变模板质粒，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。另外目的基因GC含量最好也在40-55％的范围，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果必需使用高GC含量的质粒模板，或者有局部高GC含量的质粒模板，请另外使用专门用于高GC含量模板的PCR反应试剂。
必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。

4. 基因定点突变反应：
(1) 如下设置基因定点突变反应体系：
Nuclease-Free Water———>?µl
Reaction Buffer (10X)——>5µl
引物 (10µM each)————>2µl
dNTP Mix (2.5mM each)——>4µl
待突变模板质粒(0.5µg)——>?µl
总体积——————————>49µl
按照上面的顺序依次加入各种试剂。在上述反应体系中，根据待突变模板质粒的量，计算出需加入的Nuclease-Free Water的量，使总体积为49微升。适当混匀后，加入 1 ul Pfu DNA Polymerase，混匀。如果用的PCR仪没有热盖，在反应体系上加入一滴矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
(2) 按照如下参数设置PCR仪：

步骤	循环数	温度	时间	说明
1	1	95℃	1分钟	最初变性
2	18	95℃	40秒	变性
		60℃	1分钟	退火
		68℃	1分钟/kb	延伸
3	1	72℃	10分钟	延伸、补全
4	1	4℃	长时间保持	暂时存放

说明：上面表格中1分钟/kb表示，如果待突变的质粒为6kb，那么68℃的延伸时间为6分钟。

5. Dpn I消化：
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1微升Dpn I，混匀后37℃孵育1小时。37℃孵育可以在PCR仪上进行，也可以在水浴锅中进行。Dpn I消化完毕后可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。

6. 转化、挑克隆鉴定：
感受态细菌的转化效率必需至少在107以上，否则很难得到克隆。根据所使用的感受态细菌，加入尽量多的经过Dpn I消化后的突变产物用于转化。通常每100微升感受态细菌中可以加入5-10微升经过Dpn I消化后的突变产物。按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作，在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌，全部涂布到含有适当抗生素的平板上，培养过夜。通常会得到50个以下的克隆。如果发现克隆有上千个，那么肯定是有什么地方出了问题。
对于得到的克隆，可以先挑克隆小抽酶切鉴定。以确认得到的质粒的大小和质粒中插入片断的大小与预期结果是否相符。
取3-5个酶切鉴定正确的克隆去测序，以最终确认得到的克隆是否是预期的突变克隆。通常大约每2个克隆中会得到一个预期的突变克隆。但有时也可能会因为随机因素，会测序了3-5个克隆才得到一个预期的突变克隆。

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