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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验药物的介质,而加药组加入不同浓度的药物。8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。实验步骤贴壁细胞:1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。2.5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
分钟,再在95℃下孵育10分钟。 (10)测序反应体系 (a)1μl PCR product (b) 0.5μl BigDyeTM V1 (c) 0.75μl 5x dilution buffer (d) 0.25μl biotinylated M13 primer (10 pmoles/μl) (e) 2.5μl UHP H2O. 94℃ 2分钟,再(94℃ 30秒,50℃ 15秒,60℃ 4分钟)x 30个循环。然后按DYNAPURETM Dye Terminator
4902). 成骨分化培养基: 向α-MEM (M4526) 培养基中添加10% FBS (ES-020-B), 1x 谷氨酰胺 (TMS-002), 1x P/S 双抗 (P4333), 50 μg/mL L-抗坏血酸 (A4403), 10 mM β-磷酸甘油 (G9422) and 100 ng/mL 骨形态发生蛋白2 (BMP-2) (SRP3326). Add 200 µl/well 人类脂肪MSC 细胞悬于3D扩增培养基中,以30,000 cells/well的细胞
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