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- 2025年07月05日
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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验(过滤灭菌)(100ml分装，-20°C保存)，100mg/ml氨苄青霉素(过滤灭菌)(100ml分装，-20°C保存)，配制20%葡萄糖(8磅灭菌20分钟，添加至上述LB中，终浓度为0.2%)。 6.操作步骤 (1) 晚上9：00接种。在超净工作台中接种含有Pinpoint™xa-3-CHI重组 载体的菌株，培养于两个三角烧瓶各20ml LB-葡萄糖培养基(含抗菌素Amp 120μg/ml)的摇菌管中，慢速70~90转/分钟30°C摇菌过夜。
可能会同时扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点：一、典型的引物18 到24 个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。二、选择GC 含量为40％到60％或GC 含量与模板GC 含量接近的引物。三、设计5'端和中间区为G 或C 的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交
过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区； 8、重复实验，验证结果，慎下结论。 二、 追踪污染源 如果不慎发生污染情况，应从下面几条出发，逐一分析，排除污染。 （一）设立阴阳性对照：有利于监测反应体系各成分的污染情况。选择阳性对照时，应选择扩增弱，且重复性好的样品，因强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列，反而可能成为潜在的污染源。如果以含靶序列的重组质粒为对照，100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增。阴性对照的选择亦要慎重，因为PCR敏感性极高
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