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- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY-PCR-756
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
4℃四个周；如长期保存，2X Direct PCR Mix 须-20℃；勿反复冻融超过3次。
- 英文名：
EC-U
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
50T/100T
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
2）大肠杆菌通用型（EC-U）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）普通PCR反应流程
3）反应原理
4）PCR循环
5）与荧光定量PCR技术相比较主要缺点。
大肠杆菌通用型（EC-U）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）荧光PCR简述
定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化，通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。
荧光PCR检测分为两种方法：荧光探针法和荧光染料法。
荧光探针法检测原理：
荧光PCR如何实现实时监控的呢？
Ø PCR反应体系中加入荧光染料
Ø 所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分（检测器、激发光源、热循环模块）
Ø 在扩增过程中，荧光信号随着PCR产物的增加而增强
Ø 每个循环结束后，定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加
Ø PCR软件计算出数据，用于实验结果的分析
ARMS检测方法；1个SNP位点设计双管反应，含目的基因检测及内参检测双通道。
大肠杆菌通用型（EC-U）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）技术特点：
Ø 准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。
Ø 高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。
Ø 快速：整个检测流程只需3小时。
Ø 简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。
Ø 防污染
Ø 高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。
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文献和实验荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术
位点，那么，105个这样的分子中每个分子中会至少有一处损伤。相反，如果100bp的片段，每条链上仅有6处损伤，105个拷贝分子中将有许多分子没有任何损伤。这就是UV照射有一定的片段长度限制的原因。 （二）反应液污染 可采用下列方法之一处理： 1、DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列； 2、内切酶法：选择识别4个碱基的内切
混合液（未加模板和Taq 聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30min 后加热灭活，然后加入模板和Taq 聚合酶进行正常PCR 扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA 的序列； 2）内切酶法：选择识别4 个碱基的内切酶（如Msp I 和Taq I 等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h 后加热灭活进行PCR； 3）紫外照射法：未加模板和Taq 聚合酶的PCR 混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV 照射法； 4）g 射线辐射法
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