YT310型Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(

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YT310型Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)价格厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)等生化检测试剂盒产品请联系我司咨询订购。

名称：YT310型Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)价格厂家
品牌：百奥莱博
英文名：Cu/Zn-SOD and Mn-SOD Assay Kit with WST-8
编号：YT310
产地：国产|进口
规格：100次
本试剂盒是一种基于WST-8的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD或总SOD活性的试剂盒。本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等生物样品中的SOD活性。一个试剂盒共可以进行100次检测。

试剂盒组分：
SOD检测缓冲液———————70ml
WST-8———————————800μl
酶溶液———————————100μl
反应启动液(40X)——————60μl
Cu/Zn-SOD抑制剂A——————500μl
Cu/Zn-SOD抑制剂B——————500μl

超氧化物岐化酶能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。

目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便而被广泛使用。但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测。

目前测定SOD比较先进的方法包括WST-1法和WST-8法，其中WST-8法比WST-1法更加稳定、灵敏度更高。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的的WST-8法。WST-8法的原理参考下图，WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye)，该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。


基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-8的SOD酶活力检测原理图。XO：xanthine oxidase。

WST-8的反应产物是稳定的水溶性产物，可以通过单个时间点的吸光度检测来测定SOD活力，适合高通量筛选研究。同时WST-8法测定SOD酶活力时，最大抑制百分率可以接近100%，并且可以不受一些常见的干扰因素的干扰，使检测效果比其它的一些常见方法显著改善。

本试剂盒的检测不受样品中过氧化氢的干扰。很多细胞和组织样品中含有内源性的过氧化氢，会干扰SOD的检测。本试剂盒通过添加适量过氧化氢酶等特殊方法，能有效去除常规样品中过氧化氢的干扰。例如，对于SOD标准品的检测，标准品中添加高达0.1mM的过氧化氢时，对于检测结果仍无显著影响。

哺乳动物编码3种SOD。在大部分组织中，含量最高的是定位在细胞浆中的Cu/Zn-SOD。Mn-SOD主要表达在线粒体中，并且Mn-SOD是可以被诱导表达的。Mn-SOD在某些情况下也可以定位在细胞浆中。有些组织或体液中会含有第三种SOD，extracellular SOD，简称EC-SOD。EC-SOD也是一种Cu/Zn-SOD，和编码细胞浆Cu/Zn-SOD的基因相似性很高，但有所不同。综上所述，细胞或组织内共有两类SOD，即铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)。这两种SOD酶活性的总量就是总SOD的酶活性。当用Cu/Zn-SOD的抑制剂抑制其酶活性时测定得到的就是Mn-SOD的酶活性。如果此时同时测定总的SOD酶活性，就可以计算出Cu/Zn-SOD的酶活性。

KCN或NaCN可抑制CuZn-SOD酶活性，也被大量用于测定Mn-SOD的酶活性。 但KCN或NaCN都具有剧毒，并且对Cu/Zn-SOD的抑制百分比达不到很接近100%。

本试剂盒采用了一种无毒的两步双重抑制Cu/Zn-SOD的方法，在避免使用有毒药品的情况下同时确保了对于Cu/Zn-SOD的抑制百分比达到高度接近100%，即对于Cu/Zn-SOD的抑制效果显著优于KCN或NaCN。使对于Cu/Zn-SOD或Mn-SOD酶活力的测定更加安全和准确。

注意事项：
1. 待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
2. 细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液，否则会干扰本试剂盒的检测。
3. 抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色，如果设置了使用说明中的空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
4. Cu/Zn-SOD抑制剂A对人体有刺激性，使用时请注意适当防护。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

关于YT310型Mn-SOD和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)价格厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)
编号：YT395
英文名称：First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H minus)
规格：10次
本品是一种采用了经过改造和优化的M-MuLV反转录酶(RNase H-)，用于在总RNA、mRNA等RNA模板的基础上反转录产生cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。

采用本试剂盒可以合成长达13kb的cDNA第一链。在采用M-MuLV反转录酶(RNase H-)的情况下，由于缺失了RNase H，RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解，这样反转录出来的cDNA的长度就会更长，并且产量更高。

试剂盒中提供了RNase Inhibitor，确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反转录效果。

试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物，前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录，后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。

试剂盒中提供的Control Primer为17聚，即引物的长度为17个碱基。试剂盒中提供的Control RNA为带有3’poly(A)的1.1kb RNA。

使用本试剂盒合成的第一链，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。

本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时足够进行10个cDNA第一链样品的合成。

产品组份：
M-MuLV反转录酶(RNase H-)(200U/μl)————2000U
Reaction Buffer(5X)———————————50μl
RNase Inhibitor(20U/μl)————————10μl
dNTP Mix(10 mM each)——————————20μl
Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μl)—————10μl
Random Hexamer Primer(0.2μgμl)————10μl
Control RNA(20ng/>μl)—————————6μl
Control Primer(5pmol/μl)————————6μl
DEPC-treated Water———————————0.2ml

储存条件：-20℃。


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·蛋白酶K溶液(20mg/ml)
编号：YT014
英文名称：Proteinase K Solution
规格：0.2ml|1ml
本蛋白酶K里不含DNase，不含RNase，可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。

酶活力：30U/mg。
单位定义：在37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。

本品在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。 蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。 在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。 常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。

储存条件：-20℃。


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·RNase H
编号：YT511
英文名称：Ribonuclease H
规格：100U
本酶是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。

特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。
用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
来源：E.coli MRE-600细胞。
分子量：约18.4kDa(单体)。
活性定义：37℃20分钟内，能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
酶储存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。
失活或抑制：65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. DNA-RNA杂合链中去除RNA：
a. 用反转录酶，例如RT M-MuLV反转录酶或RT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：
Reaction Buffer (10X)————2µl
无核酸酶去离子水——————217.8µl
RNase H (5U/µl)——————20.2µl
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5µl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯*(代"仿")抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。

2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
a. 用反转录酶，例如RT M-MuLV反转录酶(YT392)、RT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(YT393)或cDNA 第一链合成试剂盒(RNase H-)(YT395)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I————8µl
无核酸酶去离子水—————————————————68.8µl
RNase H (5U/µl)—————————————————0.2µl
DNA Polymerase I, E.coli—————————————3µl (30U)
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
e. 加入5µl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯*(代"仿")抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
注：Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。

3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。

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