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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
上海信帆生物科技有限公司
- 检测方法:
ELISA
- 应用:
科研实验
- 适应物种:
人,大鼠,小鼠
- 样本:
血清,血浆及相关液体
上海信帆生物在科研、中引进了一系列设备和仪器,为公司的迅速应用提供了便利条件,使达到优质高效,保证了产品的高质量。同时,公司严格遵守GMP管理的要求,从原料采购、、销售到售后服务,所有的活动均严格按照质检规程和岗位标准操作规程进行,并保留完整的记录。严格、规范的管理保证了公司产品质量稳定。
Elisa试剂盒样本处理及要求:
ELISA 的样本实验准备 在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当 天就进行 检测的样本,及时储存在 4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用, 有条件的,好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
ELISA实验中老师问题集锦:
☆★问:选择酶标仪注意事项?
☆★答:酶标比色仪简称酶标仪,通常指专用于测读 ELISA 结果吸光度的光度计。酶标仪的主要性 能指标有:测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标 仪的读数一般可精确到 0.001,准确性为±1%,重复性达 0.5%。酶标仪不应安置在阳光或强 光照射下,操作时室温宜在 15~30℃,使用前先预热仪器 15-30 分钟,测读结果更稳定。
☆★问:是否提供代测服务?
☆★答:购买我司ELISA试剂盒,可以提供免费代测服务。上海和南京地区的客户可以提供免费上门取样的服务,其他地方的老师可以把样本用EP管装好,编好号。放到泡沫箱子中,用干冰和冰袋寄送。我们是收到样本后7个工作日出实验报告。实验报告包括说明书,实验室用的仪器型号,数据,标曲等。
☆★问:实验中造成回收率偏高的原因?
☆★答:添加量不准确,精准的添加量。添加浓度不适合,添加合适的浓度。
取液吹干量多,准确的取液吹干。
取到其它相层液体,取需用相吹干。
复溶液未稀释或加入量少,正确的稀释复溶液。
☆★问:实验中出现假阳性或者假阴性的原因?
☆★答:水质原因,可以点复溶液验证,或者用纯净水。
实验操作原因,包括吸取到其它相吹干,离心不彻底,样本的污染,乳化未处理完全。可以准确的取样吹干,延长离心时间,更换样本,温浴(70℃)处理乳化现象。
仪器试剂原因,离心管未清洗干净。有机溶剂的影响,可以做试剂空白看影响结果。
衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质)。
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文献和实验MHC I 类和Ⅱ类分子抗原结合槽的结构特点 比较I类和Ⅱ类分子以各自的抗原结合槽接纳抗原肽的特点。这一特点仅仅体现了两类分子相互作用中的共性。 MHC I类分子和Ⅱ类分子抗原肽结合槽的结构和相应的功能特点 I类分子α1和α2结构域各含4段β―片层和一个α―螺旋,共同组成I类分子的抗原肽结合槽,是氨基酸(α.α.)组成变异性最大的部分。该槽两端封闭,一般只能容纳8―10个氨基酸残基组成的小肽
分子的分布及功能相似且均具有高度多态性,也被称为经典的HLAⅡ类基因。 (4)HLA-DM亚区:DM亚区位于HLA-IX)A和PSMB8之间,由二个座位即DMA和DMB组成,分别编码DM分子的。链与日链。DM基因具有多态性。DM异二聚体分子主要存在于特定的细胞器称MHCⅡ类区室(MⅡC),在外源性抗原加工提呈中起重要而独特的作用。 (5)TAP和PSMB区域:DMB和DQB2之间有一对抗原加工相关转运物基因TAPl/TAF2和一对p型蛋白酶体亚单位(proteasomesubunit
MHCⅡ类分子荷肽 九聚体进入内体后,在蛋白水解酶的作用下,L链逐步降解,最后仅剩与Ⅱ类分子抗原结合槽相连的CLIP。为了使内体中的外源性抗原肽进入抗原结合槽,需借助HLA-DM分子使ClAP与Ⅱ类分子解离。存在于内体溶酶体中的DM是一种非经典Ⅱ类分子,由。链和卢链组成。DM与Ⅱ类分子先发生物理性结合,引起Ⅱ类分子构象的改变,使得抗原结合槽中两条『螺旋略微分离,破坏了CLIP与抗原结合槽形成的非共价键,ClAP因而从抗原结合槽解离。
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