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北京百奥创新科技有限公司
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PureCol™ EZ Gel solution
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一般描述:
PureCol ™ 用于细胞培养、组织工程和作为医疗器械的涂层材料。特点和优势:
PureCol EZ Gel 旨在通过提供已经调节至中性 pH 值的培养基和胶原预配制溶液来提高凝胶的粘稠度,该产品通过试剂添加变量 pH 值调节和处理条件等变量避免了凝胶制备过程中出现的不一致性。PureCol EZ Gel 是提供牢固凝胶的理想选择,也可用于制备培养细胞的薄层。PureCol EZ Gel 胶原蛋白包装方便用户使用和储存。本产品为无菌产品,现成溶液供应。PureCol EZ Gel 的可用体积为 35 mL,通过无菌工艺生产。3D 凝胶允许研究 ECM 的力学属性,如密度和硬度,对细胞发育、迁移和形态的影响。与 2D 系统不同,3D 环境允许细胞延伸同时与所有细胞表面的整合素相互作用,从而激活特定的信号通路。在 3D 和 2D 环境中,凝胶硬度或硬度对细胞迁移的影响也不同。此外,整合蛋白独立的机械相互作用导致的缠结的基质原纤维与细胞扩展可能在三维系统中,但不是在二维系统中,后者情况下,细胞附着在一个平面。1-3其他说明:
PureCol EZ Gel 是一种即用型胶原蛋白溶液,只需在培养箱中加热至 37℃ 即可形成牢固的凝胶。该产品由纯化的 I 型牛胶原(浓度约为 5 mg/mL (0.5%))、DMEM/F-12 培养基和 L-谷氨酰胺和二肽(L-丙氨酸-L-谷氨酰胺)混合物组成,为细胞培养提供持久的 L-谷氨酰胺来源。制备说明:
3-D 凝胶制备程序1. 从 2-10°C 储存条件下取出 PureCol EZ Gel。为防止凝胶化,将产品温度维持在 2-10℃。
2. 将 PureCol EZ Gel 引入细胞培养系统。细胞可以加入到 PureCol EZ Gel 溶液中。
3. 要形成凝胶,加温至 37°C。凝胶化开始将在 40 min 内发生,但需要约 90 min 至 分钟以形成牢固的凝胶。
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文献和实验时,可选择TRUE1(TrueGel3D™水凝胶CD细胞可降解交联剂和RGD肽)作为起步配置。 试剂准备 按照产品说明书(datesheet或information sheet)准备试剂。 为了尽量减少巯基氧化,非必要时,勿将CD细胞可降解交联剂暴露于空气和室温。每次使用后务必迅速盖回试剂盖。 采用培养基、PBS或生理溶液配制储备细胞悬液或其他生物样本。 实验步骤 切记:开始混合试剂前,务必通读完整实验方案。 水凝胶混合液配制: 细胞悬液应占最终凝胶体积的1/5。相应地,配制完成凝胶的最终细胞
向聚焦之前,用ReadyPrep™ reduction-alkylation kit处理可阻断半胱氨酸的巯基,预防它们被重新氧化。如果样品未烷基化,应当在第二步平衡步骤中用2.5%碘乙酰胺进行烷基化。如果不想要烷基化,那么平衡液中应存在足够量的二硫苏糖醇(DTT),至少为1%。DTT应当在使用前立即添加到平衡液中,因为若储存,它可能会氧化。DTT在第二向条件下是带负电荷的,在凝胶中将迁移得比蛋白快,确保了分离过程的还原环境。 试剂质量不佳或配置不当的溶液 垂直条纹及其他第二向问题
蛋白向相反方向迁移,导致聚焦不完全。此外,IPG胶条在阴极端的脱水可缩小凝胶的孔大小,导致蛋白迁移减慢和聚焦不完全。脱水还能导致蛋白聚集,从而形成水平条纹。这个问题的解决方案包括用新鲜水浸泡过的芯取代阴极的纸芯,向溶胀/样品溶液中加入有机改性剂,如甘油、异丙醇或甲基纤维素(Görg 1997)。 在下一篇文章中,我们将讨论双向凝胶上垂直条纹的预防,敬请留意。 参考文献 Bio-Rad Laboratories, Cup loading tray
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