- ¥998 - 1898
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY140624-20
- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，4℃保存
- 保质期：
半年
- 英文名：
Double-Stain Apoptosis Detection Kit
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
20次/50次
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳 定等方面起着十分重要的作用。在细胞凋亡过程中，细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到 细胞外膜，而Annexin V（膜联蛋白V）对其有天然的高亲和能力，故可以用PE荧 光标记的Annexin V来检测细胞凋亡，但本方法的缺点是不能区分早期和晚期的凋亡 细胞。早期和晚期的凋亡细胞的一个重要区别在于细胞膜的完整性（凋亡早期细胞没 有丧失膜的完整性），故可以用7-AAD（7-amino-actinomycin D）来染色加以区 分。
本产品就是整合了上述两种方法的高灵敏的细胞凋亡检测试剂盒，它具有下列特 点：
1. 即开即用，不需要专门花时间准备各种成分。
2. 整合了Annexin V-PE和7-AAD检测法的优点，提高了凋亡细胞检测的灵敏度和 特异性，本方法是目前最灵敏的细胞凋亡检测方法。
3. 7-AAD具有和PI相似的荧光特性，不能通过正常细胞膜，随着细胞凋亡的发生， 质膜对7-AAD的通透性逐渐增加。7-AAD发射波谱较PI窄，对其他检测通道干扰 更小。
4. 本产品和流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测兼容。Annexin V-PE橙红色荧 光激发波长546nm，发射波长647nm。7-AAD红色荧光激发波长546nm，发 射波长647nm。
5. 本产品适用于培养细胞（悬浮或贴壁），不适用于组织样品。
双染细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-PE·7-AAD）使用及效果
2000rpm离心5分钟，收集悬浮细胞；胰酶消化液（无EDTA）消化收集贴壁细 胞。PBS洗涤细胞，2000rpm离心5分钟，收集1~5×105 细胞。取50 μL溶液A加入 5 μL溶液B（7-AAD）中，混匀，然后将A、B混合液加入到收集的细胞中，混匀， 室温避光反应5-15分钟。加入450 μL溶液A，混匀，加入1 μL溶液C，混匀，室温避 光反应5-15分钟。一小时内荧光显微镜下观察或流式细胞仪检测。
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。 图Annexin V 检测细胞凋亡原理二、试剂盒组份
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
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