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脂质组学研究的技术主要包括脂质的提取、分离、分析鉴定以及相应的生物信息学技术。生物质谱技术是目前脂质组学研究的核心工具。基于质谱技术的脂质分析策略主要包括液相色谱——质谱联用技术和“鸟枪法”脂质组学技术(shotgun lipidomics)。液相色谱——质谱联用技术策略是利用不同的脂质提取方法分别提取不同种类的脂质(lipid classes),如脂肪酸类,甘油磷脂类,固醇类等,或根据不同脂质种类的极性差异,利用正相色谱在种类的水平上将生物样本的脂质分为不同的组分,如磷脂酰胆碱类( glycerophosphocholines,GPChos)、 glycerophosphethanolamines,GPEtns)、鞘磷脂类( sphingomyelin,SM)以及心磷脂(cardiolipin,CL) 等。然后利用反相色谱将组分中的脂质分子(molecular species)进一步分离,进而利用质谱进行定性、定量分析。“鸟枪法”技术策略通常采用直接进样(direct infusion),不需要经过色谱分离,而直接对脂质提取物进行分析鉴定。其原理主要是源内分离(intrasource separation),即根据脂质分子在不同pH 值条件下带电倾向的差异,通过调整样品的pH 值,改变脂质分子的离子化倾向,并结合ESI正、负离子检测模式的切换,达到离子化过程中分开检测不同脂质分子的目的,最后利用串联质谱技术进行分析鉴定和定量。脂质组学相关的公共资源:LIPIDMAPS、Lipid Bank、Cyber Lipids(http://www.cyberlipid.org )和LIPIDAT(http://www.lipidat.chemistry.ohio-state.edu/home.stm )。
技术路线及方法:
血清:
1) 样品量要求:500µl/例,一定避免反复冻融。
2) 收集步骤:血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固。然后离心取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.5ml,-80度冻存寄送。
组织及细胞沉淀:100mg/sample
其他种类的样品在收集之前请联系公司销售工程师。
(威斯腾生物--原代培养、细胞敲除、模式动物一站式科研服务!)
实验服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学类 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀(Co-IP) | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA(酶联免疫吸附法)技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒类 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| 生长因子芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 信号通路磷酸化水平检测芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 生长因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 炎症因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因编辑动物 | |
| 趋化因子芯片 | 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 膜片钳实验 | |
| 细胞生物学 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理类 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片(限人和小鼠来源样本) |
| Tunel(原位末端凋亡法)检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片(限人和小鼠来源样本) |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研方案设计与SCI相关服务 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | SCI论文翻译润色服务 |
| 特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等) | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 水迷宫实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 神经系统药物药效学评价 |
| 旷场实验 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 分子药理研究平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 生物膜片钳药物筛选平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 常规药物体外筛选 | 抗炎免疫药物药效学评价 |
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
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文献和实验色谱与质谱联合而达到检测大分子物质的目的。 3.代谢组学发展趋势 代谢组学是定量描述生物内源性代谢物对内外因变化应答规律的科学,能够直接反映生命体的终端和表型信息,近年来在疾病诊断和分型、生物标志物发现、药物研发、基因功能解析、代谢途径及调控机理等领域发挥着重要作用。从代谢组学和脂质组学逐年发表的 SCI 文章(图 2)可以看出,代谢组学发展迅猛。 图 2 | 代谢组学在“Web of Science 核心合集”逐年发表的文章统计图 检索日期:2020 年 5 月 3 日,检索关键
三句话读懂一篇 CNS:慢性压力引发抑郁究竟为何?15 万中国人研究,为喝酒致癌又添新证
教授团队联合在 Science Translational Medicine 杂志上在线发表了研究论文 Lung cancer scRNA-seq and lipidomics reveal aberrant lipid metabolism for early-stage diagnosis。 该研究应用单细胞转录组学、血浆脂质组学、机器学习和质谱成像综合分析早期肺癌的脂代谢特征,开发了一套人工智能辅助的早期肺癌代谢检测方法,准确率高达 90%! 图 5:来源 Science
创刊 3.代谢组学的应用与发展 3.1 代谢组学促进多学科,多领域交叉发展 代谢组学的不断发展,促使分子分离和检测仪器,结构解析的制造商以及相关科学家们需要不断地研发出各种针对代谢组学的硬件、软件和技术支持。也就意味着需要不同领域和学科的技术支持,特别是基于分析化学的结构解析方面。同时,在代谢组学的发展中至关重要的是基于计算机科学(程序语言)的大数据处理和分析。因此,代谢组学的发展离不开多科学、多领域的技术发展。 3.2 代谢组学在医学领域中的应用 新药的筛选和开发:新药研发存在风险高
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