- ¥790
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY91202-50
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
50次
本产品是经过精心优化的、基于MMLV逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管 式RT-PCR试剂盒，它含有除模板RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂， 包括MMLV逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等，可以在同一反应管内 完成RNA→cDNA→PCR反应（RT-PCR反应），本产品特点如下：
1. 一管式完成RT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个，即RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到 了最低，极大降低了加样误差，增加了实验的可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA 模板。
5. 高灵敏度，每个RT-PCR体系最低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模 板RNA的最长达2000 nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。
7. 附赠10次阳性对照（模板及引物），实验失败时便于分析原因。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq使用及效果
在无RNase的PCR管中加入100 ng-2 μg总RNA、10 pmol RNA特异性引物 （两种）、补水到13 μL，再加入15 μL一管式RT-PCR Buffer(2×)，2 μL MMLVTaq Mix，轻柔混匀后直接进行RT-PCR。RT的条件是42℃保温30-60分钟，PCR 条件根据引物决定，RT-PCR结束后可以直接电泳。
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文献和实验合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
合成 cDNA，产生 cDNA:RNA 复合物。该过程被称为第一链 cDNA 合成。如果存在 RNase H 活性（如野生型 AMV 和 MMLV 反转录酶），则 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 会在第一链合成期间被切割。第一链 cDNA 可以直接用于 RT-PCR 等实验应用中，热稳定 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）将复制 cDNA 的互补链。 在 cDNA 文库构建和测序中，将第一链 cDNA 作为模板，获得代表 RNA 靶标的双链 cDNA。这个过程被称为第二链cDNA 合成
(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温h (60 度 -70度 )有效地逆转录mRNA，从而消除了5‘端由于高CC含量导致的mRNA 二级结构对逆转录的影响;改进之四是采用热启动PCR (hot start PCR)技术和降落PCR(touch down PCR)提高PCR反应的特异性。随着RACE技术日益完善，目前己有商业化RACE技术产品推出，如CLONTECH的MarathoTM技术和SMART TM RACE技术术。邢桂春等(2001)先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应
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