- ¥190
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY100604-1
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Salmon Sperm DNA Solution
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
1 mL
本产品是浓度为10 mg/mL的、经过热变 性处理的单链鲑鱼精DNA溶液，可以用于 Southern、Northern预杂交，还可以用 于酵母化学转化和电转化。本产品即开即 用，非常方便。
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文献和实验液（8 cm × 8 cm 的膜加 5 mL 即可），将膜的背面贴紧杂交瓶壁，正面朝向杂交液。放入 42 ℃ 杂交炉中，使杂交体系升到 42 ℃。取经超声粉碎的鲑鱼精 DNA（已溶解在水或 TE 中）100 ℃ 加热变性 5 min，迅速加到杂交瓶中，使其浓度达到 100 μg/mL。继续杂交 4 hr。鲑鱼精 DNA 的作用是封闭 NC 膜上没有 DNA 转移的位点，降低杂交背景、提高杂交特异性。2．杂交倒出预杂交的杂交液，换入等量新的已升温至 42 ℃ 的杂交液，同样加入变性的鲑鱼精 DNA。将探针
EDTA, 变性的标记核酸探针，5×Denhardt液，0.5%SDS, 100μg/ml变性的鲑鱼精DNA。尽可能赶尽气泡后，将塑料袋严密封口，杂交反应在68℃水浴中进行，所需时间视探针和检测靶DNA的性质及探针的比活性等情况而定，一般4～20h。 5．洗膜 取出塑料袋，用剪刀剪开，小心取出滤膜，立即浸入盛有2×SSC和0.5%SDS溶液的盘中，室温下漂洗5min。再将滤膜移入2×SSC和0.1%SDS溶液中，室温下洗涤15min（轻轻摇动）。然后将滤膜移入0.1×SSC
于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中nacl的浓度调至0.1mol/l，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合dna溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切dna。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀dna。离心回收dna并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的od260 值并计算出精确的dna浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子dna
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