微滴生成油FS-P

产品简介
本产品应用于微流控领域中，为制备油包水微滴的核心试剂。微流控技术利用对微尺度下流体的控制来代替常规化学或生物学实验室的各种功能，具有高效性、微型化、集约化、样品消耗少及廉价、可靠、易制作等优点，是一个包括了工程学、物理学、化学、微加工和生物工程的多交叉学科。微滴在化学和生物领域中具有巨大的使用价值，能为研究对象提供独立的微环境，具有良好的单分散性，适用于定量研究，在单分子、单细胞分析、酶动力学、蛋白质合成及高通量筛选等研究领域具有巨大潜力。

产品描述
FS系列活性剂是广东顺德墨赛生物科技有限公司独立研发的微流控试剂产品。FS-P适用于制备油包水微滴以进行分子生物学检测，例如聚合酶链式反应（PCR），适合于探针法的PCR体系。
每种产品均以2%或5%的浓度预溶于适合微流控的氟油 (3M公司， FC-40™ Fluorinert™或Novec™ 7500)。请注意：对于PCR实验，我们仅建议使用FS-P配合Novec-7500进行。
注：本产品仅用于科研，不能用于临床诊断。

产品特点：

• 稳定性好
• 可直接使用
• 生物兼容性好
• 微滴直径：20-100μm
• 微滴内容物不发生泄漏

实验数据
1. 静置稳定性的测试
通过对生成后立即取样的微滴与放置7天后的进行对比，如下图所示，在显微镜下可以观察到两者几乎没有区别，微滴可以继续呈现蜂巢式的均一性排布，可以说明该油相所制微滴具备优秀的静置稳定性能。

2. 微滴式数字PCR测试
以master mix（无表活）配合引物、探针及DNA模板作为反应体系，如图所示，在微流控芯片中生成均一的油包水微滴，收集微滴后进行PCR扩增热循环。


如上方图b、c所示，显微镜观察下，PCR扩增热循环前微滴形态基本与PCR扩增后的保持一致，表明微滴经过30至50轮热循环后，其均一性依然保持良好，仍然呈现规律的蜂窝形貌。
再对微滴荧光强度进行定量分析，利用光机模块对每个通过的微滴进行荧光信号采集并滤波处理，在随机一段采集片段中可以清晰看到，几个阳性峰的荧光强度是众多阴性峰的4倍左右，符合显微镜观察结果。调整汞灯曝光率，也可获得下方清晰的阴阳性微滴对比效果图。


利用image pro软件对热循环后的微滴进行CV值模拟，显示微滴直径CV值低于5%。

3. 单细胞/微生物检测
利用CHO细胞培养基作为分散相， 在微流控芯片中形成油包水微滴，静置一天时间后，使用显微镜观察如下，细胞存活于微滴中心，并没有附着于微滴表面，证明可以实现单细胞包裹实验。进一步的细胞繁殖数据更新中。


使用方法
1. 微滴大小
表面活性剂的性能受到微滴大小及水相性质的影响，微滴越大，微滴间的融合越有可能发生，尤其是在PCR热循环过程中。100μm直径的微滴是在保证室温稳定性情况下能达到的最大的微滴尺寸。在PCR实验中，推荐生成50μm或更小尺寸微滴。微滴的最佳尺寸需根据具体应用和试剂来确定。
2. 过滤
样品在打开之后容易被空气中的灰尘及微粒污染，所以第二次使用时需要过滤。推荐使用0.2μm或0.1μm的聚醚砜滤膜，同样型号的乙酸纤维膜也可使用。聚四氟乙烯（PTFE）在过滤时压力较高，可影响产品的性能，所以不推荐使用。
3. 实验操作步骤（数字PCR微滴实验为例）
3.1 PCR体系制备：
为了防止蛋白质聚集，有的商业PCR体系和一些学术文章会建议添加表面活性剂。但是在热循环条件下，特定浓度的表面活性剂及某些成分会影响微滴的稳定性。实验者必须确保PCR体系没有添加表面活性剂，并根据FS系列活性剂的浓度及其他参数优化实验条件。
3.2 微滴生成：
各地区室温存在差异，温度较低可能会使溶液中的表面活性剂析出，使用前将溶液置55℃水浴中摇匀复溶即可继续使用。配合PCR体系，使用特定装置在微流控芯片中方可生成稳定的油包水微滴。
3.3 PCR程序：
根据体系要求进行设置PCR程序。需要注意建议扩增循环次数等于或低于45轮；升降温速度控制在2℃/s以内。


应用实例
与广州市第一人民医院合作，利用FS-C系列产品为连续相，包裹以SYTO-9染料标记染色体的大肠杆菌，通过微流控芯片生成稳定均一的油包水微滴，并进行荧光检测判定阳性率。首先利用荧光显微镜可以观察到含有标记大肠杆菌的阳性微滴比未包裹大肠杆菌的微滴更加明亮，区别明显。在荧光检测系统中也可以看出两者荧光值的差异。