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- KALANG
- 中国大陆
- KL234
- 2025年07月14日
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- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
DNA bisulfite conversion kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50次
DNA重亚硫酸盐转化试剂盒
规格：50次英文名：DNA bisulfite conversion kit
表观遗传学是研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因的表达和调控的可遗传变化的一门遗传学分支学科。表观遗传的现象很多，比如RNA介导的基因沉默，组蛋白修饰等。但是，在高等真核生物中一个主要的表观遗传学机制为DNA的甲基化。
本产品是特别针对DNA甲基化研究中的DNA重亚硫酸盐转化所开发的试剂盒。试剂盒可以在2 h内完成对DNA样品的处理，其中未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率高达99%以上。同时，本试剂盒采用独特的DNA保护剂组分，使得转化后DNA的质量和回收率都有很大的保障，另外，本试剂盒还采用了柱上去亚硫酸基团的方法，使得整个操作流程更为简便。
产品特点：
简单快速：转化和纯化流程可在2 h内完成，对仪器设备要求较低，适于各级研究机构对DNA样品进行重亚硫酸盐转化。
转化率高：DNA样品中未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率高达99%以上。
反应灵敏：本试剂盒可处理少至500 pg，多至2.5 µg的DNA样品。
效果优异：本试剂盒处理后的DNA样品适合于甲基化特异性PCR，测序法及芯片法等后续甲基化分析方法。
储存条件：
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。缓冲液DB加入无水乙醇后于4℃下保存，缓冲液DP于-20℃下保存，Carrier RNA配制成储液后置于-20℃。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1． 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在15 ml漂洗液PW中加入60 ml无水乙醇，以及在10 ml缓冲液DB中加入30 ml无水乙醇。
2． 若处理的DNA样品少于100 ng， 那么强烈建议将Carrier RNA加入到结合液PB中，至终浓度为10 μg/ml。
3． 所有的离心步骤都为使用台式离心机在室温下进行。
4． 纯化DNA前请使用平衡液BL处理吸附柱，这样可以最大限度的激活硅基质膜，提高得率。
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- 内容
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文献和实验DNA 样品，将未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U）。重亚硫酸盐处理不会影响甲基化的胞嘧啶（m5C） 。为了检测甲基化位点，一对引物经设计带有鸟嘌呤（G），可与目标序列中的 m5C 配对；为了检测未甲基化位点，另一对引物带有腺嘌呤（A），可与重亚硫酸盐转化分子中的U配对（随后，与后续 PCR 循环中的胸腺嘧啶（T）配对）。通过引物配对得到的阳性 PCR 扩增结果可用于确定位点的甲基化状态（图 7）。 图 7.甲基化特异性 PCR 第一步，使用重亚硫酸盐处理 DNA 样品，将未甲基化的胞嘧啶转化
脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变（见图1），行PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶，最后,对PCR产物进行测序并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。此方法是一种可靠性及精确度很高的方法，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的克隆测序,过程较为繁琐、昂贵[27]。 图1：重亚硫酸盐处理过程示意图。DNA经重亚硫酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶不变，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶 2.2.3 甲基化特异性的PCR（methylation
LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
的定量。 更多有关特定CpG位点的甲基化的详细信息，可采用重亚硫酸氢盐修饰后测序分析。 LightCycler主要应用：实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析 我们使用罗氏诊断公司的LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在LightCycler®480实时荧光PCR仪上，通过MS-HRM测定法对两种已知的经过启动子（FANCE和MGMT）甲基化的DNA修复基因的检测性能。 材料和方法 将多种细胞株的DNA样本作为检测模板。每μg的每种DNA样本都经过重亚硫酸盐修饰
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
