pfu酶

pfu酶

本酶用于DNA的高保真扩增，，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。其PCR产物为平端，可直接用平端载体克隆。 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。本酶浓度为5U/μl。

本品组份(500U)：

Pfu DNA Polymerase———————————————500U

10×Pfu Buffer+(with MgSO4)-——————————1ml

SuperPure dNTP mix(10 mM Each)—————————0.2ml

单位定义：一个单位Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于99%,经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：50mM Tris-HCl(pH 8.2)，0.1mM EDTA，1mM DTT，Stabilizers，50% glycerol。

10×Pfu Buffer (含Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl，100 mM(NH4)2 SO4，20 mM MgSO4，其他成分。

注意事项：

(1) Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，建议Pfu酶的延伸速度为每分钟1kb 如扩增片段小于4kb；延伸速度为每分钟0.5kb 如扩增片段大于4kb。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加dNTP 后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR 反应。

(2) 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55～80℃ 之间，引物浓度在0.1～0.5μM之间，比Taq酶略高。

(3) Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。

(4) 高保真PFU 对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。

储存条件：-20℃。