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- 2025年07月14日
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-20℃
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长期
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大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
500U|3000U
pfu酶
本酶用于DNA的高保真扩增，，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。其PCR产物为平端，可直接用平端载体克隆。 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。本酶浓度为5U/μl。
本品组份(500U)：
Pfu DNA Polymerase———————————————500U
10×Pfu Buffer+(with MgSO4)-——————————1ml
SuperPure dNTP mix(10 mM Each)—————————0.2ml
单位定义：一个单位Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于99%,经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
酶贮存缓冲液：50mM Tris-HCl(pH 8.2)，0.1mM EDTA，1mM DTT，Stabilizers，50% glycerol。
10×Pfu Buffer (含Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl，100 mM(NH4)2 SO4，20 mM MgSO4，其他成分。
注意事项：
(1) Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，建议Pfu酶的延伸速度为每分钟1kb 如扩增片段小于4kb；延伸速度为每分钟0.5kb 如扩增片段大于4kb。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加dNTP 后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR 反应。
(2) 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55～80℃ 之间，引物浓度在0.1～0.5μM之间，比Taq酶略高。
(3) Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
(4) 高保真PFU 对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。
储存条件：-20℃。
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文献和实验请教：高保真酶 关于taq plus 求教Pfu酶作PCR的要求 Pfu扩增求救！！！！ 请问哪一种高保真DNA聚合酶比较好呢？ Pfu DNA 聚合酶的问题 pfu的扩增条件！ 关于高保真酶问题？ 求助：高保真酶 关于高保真酶 关于高保真的酶 pfu高保真酶怎么那么难用？ Pfu DNA聚合酶------常见问题 请教如何做病毒的 pfu 请教Pfu扩增2kb片段 高保真酶咋还不如普通的Taq酶? 请教关于高保真酶问题 哪个公司
Polymerase，Pfu)是从高温嗜热菌Pyrococcus furiosis分离出的高保真（High Fidelity）耐高温DNA聚合酶。Pfu酶能纠正DNA扩增（PCR）过程中产生的错误，而传统的Taq DNA 聚合酶(Taq DNA Polymerase，Taq)，Tth DNA聚合酶及它们的变体如AmpliTaq，KlenTaq等都不能。高温DNA聚合酶Vent、DeepVent、Tli、Pwo、Pfu、UlTma等都具有校正功能（Proof reading），但Pfu酶是迄今发现的所有高温DNA
wolfdance 我同事从植物提取物中获得了一个小分子化合物，已经证实这个化合物可以跟A受体结合从而引起相应的效应。我同事现在想知道该化合物在A受体的结合位点。估计要用到点突变技术，请问哪个实验室或者公司有类似的外包业务。价格大概多少。除此之外还可以采用什么方法。 请各位专家不吝赐教！谢谢！ laforet 自己买引物和Pfu酶就可以做点突变了，很简单的，只需要最基本的分子克隆知识。
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