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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 库存:
大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
50μl×50次|50μl×200次
SYBR Green qPCR预混液
本品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR Green I等试剂预混成一种适合Real Time PCR反应检测用2×Premix Type试剂,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板和引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。本品采用全新的Hotmaster Taq DNA 聚合酶,该酶不同于一般Hot-start 酶之处在于,一般的Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
试剂盒组分(50次):
2×SYBR qPCR Mix————————1.25ml
100×ROX参比染料————————25μl
注意事项:
1. 本制品含独立参比染料ROX,客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2. 本制品含SYBR Green I 强光下易分解,降低敏感度,使用时避免长时间强光照射本制品。
3. 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。
4. 本制品含有4 mM MgCl2(反应体系终浓度是2 mM Mg2+),可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。
储存条件:-20℃,有效期半年。
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文献和实验液为预先优化好的混合物,通常包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、MgCl2及其他专利的添加剂。 一些专业人士坦言,对于多个指标,包括qPCR 效率、特异性、灵敏度、速度及耐受多个循环条件和样品类型,目前还尚未实现完美的平衡。大部分qPCR预混液能够在一些方面胜出,但很难是全部。如何选择最适合的那一个,小编下面给出了一些建议。 探针 还是染料? 当然,就多重分析而言,探针法是唯一选择。SYBR Green只适合单重反应。不过,SYBR Green的优势
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
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