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- KALANG
- 中国大陆
- KL007
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50T/200T
真菌基因组DNA提取试剂盒（非柱式）
编号：KL007规格：50T/200T
原理简介
真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液液氮研磨。经过前期处理的菌液，再经过裂解液及蛋白酶处理后，玻璃奶吸附DNA，去掉其他杂质，，可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。
注意事项
1．由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。
2．如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA片段很短，成弥散条带，可减少玻璃珠处理时间。
操作步骤
1．样品的处理：
1）对于酵母菌，取1-2ml培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入300ul 裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。
2）霉素(孢子也可相同处理)：取50-100mg菌丝，加300ul裂解液，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。
3）大型真菌（如蘑菇等）：称取50-100mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3 次，使样品研成粉末（如无液氮，可加300ul裂解液后用玻璃研磨器适当研磨），加300ul裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min。
2．加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，55℃水浴消化，15－30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次。
3．12000转离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。
4．在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。
5．12000rpm离心5分钟，去上清，核酸在沉淀中。
6．沉淀中加入500ul结合液，55℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解。
6．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
7．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入50－100ul TE缓冲液混匀溶解，55℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。
8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。
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文献和实验Nature：2000 年前的 8 坨粪便，揭示肠道微生物进化与慢性病发展间的联系
与慢性疾病发展之间的联系。 图片来源：Nature 与其他哺乳动物一样，人体不仅由多种多样的细胞、组织、器官组成，还会被包括细菌、病毒和真菌在内的数万亿微生物占据，它们共同组成了人体的多元化。有学者甚至指出，人体内存在两个基因组，一个是从父母那里遗传来的人基因组；另一个则是出生以后才进入人体的共生微生物基因组，其遗传信息的总和叫「微生物组」。两个基因组相互协调、和谐一致，保证了人体的健康。其中，肠道菌群是被研究最多的，且其与人体的多种疾病存在关联，更重要的是，体内的肠道菌群并非一成不变，它们会
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