DAF-FM DA 即3-Amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate , 也称DAF-FM diacetate 或4- Amino,5- aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate。DAF-FM DA 是最新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针,比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 diacetate 有多方面的改进。首先,DAF-FM DA 和DAF-2 diacetate 相比,最后和一氧化氮反应形成的荧光产物受pH 值的影响小,在pH 值大于5.5 时不受pH 值的影响。其次,DAF-FM DA 和DAF-2 diacetate 相比,前者产生的荧光更加稳定,不容易淬灭,这样更加便于检测。另外,DAF-FM DA 和DAF-2 diacetate 相比,前者对一氧化氮的检测灵敏度更高,相同条件下检测灵敏度可以提高接近2 倍,最低检测浓度可以达到3nM。
DAF-FM DA 可以穿过细胞膜(cell-permeable),进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM 。DAF-FM 本身仅有很弱的荧光,但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光,激发波长为495nm,发射波长为515nm。DAF-FM DA 检测一氧化氮的机制可以参考上图。任何可以检测fluorescein 的仪器,包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。右图为DAF-FM 在不同浓度一氧化氮存在时的发射荧光扫描图谱(fluorescence emissionspectra)。DAF-FM DA 的分子量为496.4,分子式为C25H18F2N2O7,HPLC 分析纯度大于98%。本DAF-FM DA 为溶解于DMSO的淡黄色溶液,浓度为5mM。