超滤管[15ml 10KD]

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

体染色步骤中去除游离染料的第 4、5 步必不可少，以避免游离染料对后期实验的干扰。这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。 c、去除游离染料的方法推荐选择 3~10KD 的超滤管，利用其置换溶剂功能去除游离染料。具体步骤和实验参数请咨询超滤管厂商。 d、染料标记外泌体与细胞共孵育的培养条件尽可能使用无血清培养基，以提高细胞对染料标记外泌体的摄取效率，共孵育参考时长为 2 小时。 e、本染料也可用于细胞膜染色，参考剂量染料浓度为 2X10–6 M，细胞浓度为 1X107 cells

干货：外泌体的细胞摄取实验报告

/孔 实验内容： 1. 外泌体荧光标记并去除游离染料 1.1. 用 PBS 将提取的外泌体浓度调整到约 1×1011Particles /mL 1.2. 配制染色孵育体系 1.3. 去除游离染料 染色完成后，于生物安全柜中加入 600μL PBS 在样品里，使用 100 KDa 超滤管，以 3000 ×g 的离心力离心 5 ~10 min， 进行超滤置换，去除溶液中游离的染料，将上室样品浓缩至原体积 重复置换 2 次 收集超滤管上室的样本, 送检 NTA(50μl)、BCA(50μl

影响蛋白超滤的因素以及使用超滤膜的注意事项

，如果希望100%截留某个蛋白，一般膜孔径选择为目标蛋白的1/3-1/5。 (八)问题：用10KD，15ml的超滤管超滤含20KD目的蛋白的蛋白溶液，会不会有目的蛋白穿过滤膜呢，我同学用这个超滤管超滤17KD的蛋白液，竟然有目的蛋白透过滤膜 可能会有一定的透过损失，因为截留和分子的形状也有关系。 为了100%截留, 超滤膜的截留分子量最好是目的蛋白的1/3比较保险 (九)问题：我们公司需要的是通过超滤管的那部分液体，将我们的产品分离，我说的超滤液就是指离心