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文献和实验对于PCR 的影响,不妨用ddH2O. 引物的稳定性依赖于储存条件。应将干粉和溶解的引物储存在-20℃。以大于10μM 浓度溶于TE 的引物在-20℃可以稳定保存6 个月,但在室温(15℃到30℃)仅能保存不到1 周。干粉引物可以在-20℃保存至少1 年,在室温(15℃到30℃)最多可以保存2 个月。注意:溶解之前先离心一下,防止一开盖就飞了。 引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0.1 到0.5μM.较高的引物浓度会导致非特异性产物扩增。通常跟着引物来的说明书会告诉你,关于寡核苷酸的计算
PCR反应通过变性、退火、延伸三个循环步骤,使目标DNA片段曾指数扩增。 因此,PCR系统是一个极其灵敏的信号放大系统,能将极微弱、甚至是单拷贝的基因信号检测出来。 但是常规的PCR不能反映起始样本中目的基因的含量水平,从而限制了它在临床检测中的应用。 荧光定量PCR是指通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析的一项新技术。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根
一、实验步骤 1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样: 反应物 体积(μl) 终浓度 去离子水 29.4 10×Buffer B
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