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- KALANG
- 中国大陆
- KL009
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
PCR CleanUp Kit;DNA Purification Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50次
PCR/DNA纯化试剂盒
英文名：PCR CleanUp Kit;DNA Purification Kit编号：KL009
规格：50次
PCR纯化试剂盒，也称DNA纯化试剂盒是一种用于PCR产物纯化或从多种DNA反应体系中纯化DNA的试剂盒。
适用于PCR反应后去除引物，酶，矿物油，甘油，盐等杂质；也同样适用于酶切，连接，磷酸化，补平或切平，随机引物等反应后的DNA纯化。所得DNA可直接用于酶切，连接，转化细菌，测序，PCR，杂交等后续操作。本试剂盒适用于纯化100bp-10kbDNA，长至30个碱基的引物均可被完全去除。
本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使DNA能在离心过柱的瞬间，结合到DNA纯化柱上，在一定条件下又能将DNA充分洗脱，从而实现DNA的快速纯化。无需酚氯*(代"仿")抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需不足15分钟即可完成。
每个DNA纯化柱可以结合的DNA量的上限约为15微克。
DNA回收效率约为90%。接近100bp或10kb的DNA*(代"片")断回收效率要略低一些，大于10kb的DNA回收效率迅速下降。另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。
每个试剂盒足够纯化50个平均体积不超过400微升的DNA样品。
保存条件：
室温保存，一年有效。
注意事项：
第一次使用前在溶液II(洗涤液)中加入39ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。溶液I对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
使用说明：
1.加入等体积的溶液I，混匀。例如如DNA样品体积为100微升，则加100微升溶液I。如果等体积混合后体积较大，可以把部分样品加入到纯化柱内，经离心处理后，再加入剩余的样品继续处理。矿物油对于本试剂盒没有干扰。
2.加入到DNA纯化柱内，室温放置1分钟。
3.最高速(16000g，约12000-14000rmp左右)离心1分钟，倒弃收集管内的液体。注意：这一步一定要达到16000g，较低离心速度会导致回收效率下降。
4.在DNA纯化柱内加入700微升溶液II，室温放置1分钟。
5.最高速离心1分钟，洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
6.再加入500微升溶液II，最高速离心1分钟，进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
7.最高速再离心1分钟，除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。
8.将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入30微升溶液III至管内柱面上，放置1分钟。用1.5ml离心管作为收集管。溶液III需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液III沾在管壁上，一定要震动管子，使液体滑落到管底，以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的pH应不小于6.5。如需得到较高浓度的DNA，可以只加20微升溶液III，但产量会略有下降。放置较长时间例如3-5分钟，会对提供产量略有帮助。
9.最高速离心1分钟，所得液体即为高纯度DNA。
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文献和实验究人员使用酶处理的方法研究甲醛固定较温和的样品。Millipore公司有商品化的Micrococcal Nuclease处理的ChIP试剂盒（EZ-Enzyme）提供。 3. 染色质免疫沉淀 Input对照： 在进行免疫沉淀前，需要取一部分断裂后的染色质做Input对照。Input是断裂后的基因组DNA，需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联，DNA纯化，以及最后的PCR或其他方法检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果，还可以根据Input中的靶序列
、逆转录等原理上并无多大差异，只是采用的荧光素种类更多，这可以满足不同来源样品的平行分析。样品制备的常用试剂：对于检测表达的芯片，样品制备通常涉及（m）RNA的纯化，cDNA的合成，体外转录或者PCR，标记等步骤。而对于SNP或者突变检测，则往往涉及Genomic DNA纯化和PCR、标记等步骤。1. RNA纯化：从样品中分离纯化高质量的RNA是非常重要的第一步。由于RNA样品中的DNA碎片会影响后继的PCR反应，所以要彻底除去样品中的DNA。通常用mRNA纯化的方法可以除去DNA片断
分断裂后的染色质做Input对照。Input是断裂后的基因组DNA，需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联，DNA纯化，以及最后的PCR或其他方法检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果，还可以根据Input中的靶序列的含量以及染色质沉淀中的靶序列的含量，按照取样比例换算出ChIP的效率，所以Input对照是ChIP实验必不可少的步骤。 Beads选择： 接下来，利用目的蛋白质的特异抗体通过抗原-抗体反应形成DNA-蛋白质-抗体复合物，然后使用Agarose beads
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