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Gibco
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5000mL
Hanks' 平衡盐溶液 (HBSS) 适用于各种细胞培养应用,例如解离前清洗细胞、运输细胞或组织样品、稀释细胞进行计数和制备试剂。含钙和镁离子的配方通常用作运输培养基或用于试剂制备。
我们提供多种 Gibco™ HBSS 配方用于多种细胞培养应用。
HBSS 的改良方式如下:
包含不含
•钙•酚红
•镁离子
• 葡萄糖
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文献和实验。 ●再一次在培养基中悬浮细胞,计数和接种细胞,进行培养。 (3)Dispase ●用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片,用不含钙镁的平衡盐溶液清洗组织碎片几次。 ●加入Dispase(0.6~2.4单位/ml 溶解在无钙镁的平衡盐溶液) ●在37℃孵育20分钟到几个小时。 ●通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液,以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚,在碎片中加入新鲜的Dispase。 ●通过离心在平衡盐溶液中清洗悬液几次。 ●再一
病细胞系或类淋巴细胞系,要经Ficoll分离,作单细胞分离处理,但若为实体组织或贴壁生长的上皮成纤维样细胞,需采用酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶等),化学法(EDTA、EGTA和柠檬酸盐)消化分散液或洗液最好用无钙、镁PBS,柠檬酸盐的浓度为40μmol/L。并同时采用机械分散法,将经消化处理的膨松组织,用玻璃珠悬摇或用吸管吹打分散均可,用PBS洗2~3次后重悬,最好过一下尼龙或不锈钢网筛100μm和20μm。细胞浓度要保证在1~2×106/ml。若标本用于测定单个细胞,需加入1~5mg/L
培养液。3. 培养液出现沉淀,同时pH 发生变化: 细菌或真菌污染。 丢弃培养物或用抗生素除菌。4. 培养细胞不贴壁: 胰蛋白酶消化过度;支原体污染;培养液中无贴壁因子。 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。5. 悬浮细胞成簇: 培养液中含钙、镁离子。支原体污染。蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA。 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞,轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。 分离培养物,检测支原体。如发现
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