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microRNA Isolation Kit, Human Ago2
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上海甄准生物
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microRNA Isolation Kit
microRNA Isolation Kit——分离miRNA或靶mRNA的新工具
近年来，microRNA(miRNA)成为生命科学和医学领域的明星。虽然只有22个左右的碱基，但是在基因表达调控中起着至关重要的作用，参与细胞分化、个体发育，且与多种疾病相关。因此对于miRNA的研究越来越多。传统的miRNA分离方法是结合了基于酚/胍的样品裂解和硅胶膜离心柱，直接将总RNA分离出来，不能直接分离出miRNA。 Wako的miRNA纯化试剂盒能够制备高纯度的miRNA片段，在细胞中，成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC)，此纯化试剂盒利用免疫沉淀方法，与Ago蛋白结合抗体的特异性，分离miRNA。纯化的miRNA片段含有非常少的rRNA和tRNA降解片段。与传统的miRNA纯化方法相比，有效提高了miRNA的克隆效率。纯化的miRNA可用于分析miRNA的靶mRNA。 n 特点 1) 内源性Ago蛋白的免疫沉淀 2) 高度纯化与Ago蛋白结合的miRNA 3) 其他RNAs的污染少，比如rRNA & tRNA 4) 纯化的microRNA片段可用于高效的microRNA克隆和微阵列 5) 可同时分离miRNA和靶mRNA，便于直接进行后续的靶mRNA的克隆和定量分析 与常规方法比较
图1：使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2纯化microRNA片段 从培养的人类细胞系（HeLa,HepG2,HEK293）中纯化的microRNA片段用Urea-PAGE和银染方法（Wako Cat. No. 311-03961；CLEAR STAIN Ag）检测。每个细胞系的数目大约是5×106。上样量是用该试剂盒纯化后获得的5ul microRNA溶液（制备的溶液一般是10ul）。 siRNA药理研究 将小分子干扰RNA（siRNA）直接注入细胞中，这些siRNA结合蛋白元件，也可形成RISC，此试剂盒也可纯化与Ago2结合的siRNA，便于后续的siRNA研究分析。因此此试剂盒不仅能分离miRNA，亦可作用于siRNA，大大拓宽了试剂盒的使用范围。 后续研究： 1）RNAi的抑制效果 2）siRNA的药代过程 3）体内siRNA的稳定性 4）毒性/副作用 5）对于非特异性mRNAs的脱靶效应 货号 品名 规格 291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests 292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests 292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 10tests 297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests 290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests 298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 200units 292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 500units 298-67901 PCR Purification Kit 30tests 298-68001 Target mRNA Cloning Kit 10tests 更多产品，更多优惠！请联系我们！ |
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文献和实验的3’翻译区(3’UTR)结合到位于胞浆的P-body(processing bady)中。 4) 作用方式与匹配程度有关： ①如果miRNA(microRNA)与靶mRNA匹配完全，则该复合体降解mRNA； ②若两者序列部分匹配，尤其是miRNA(microRNA)的5’端2-8个被称为种子序列(seed sequence)的核苷酸与靶mRNA完全匹配，则通过抑制靶mRNA的翻译来沉默特定基因。 ③有报道指出，有些miRNA可以通过与DNA匹配的方式进而调控表观遗传学变化
子，QIAGEN自有妙招，即便是FFPE组织标本，采用经典的硅胶膜选择吸附离心柱，配上优化好的各种buffer，可以快速纯化出所有大于18个核苷酸的RNA。另外还提供Protocol用于单独富集 第二步是逆转录反应，这里就有别于普通的针对mRNA的RT反应了，因为真核生物mRNA都是有poly-A尾巴的，这样Oligo-dT逆转录引物就很容易结合到mRNA上来合成cDNA了。miRNA就缺了poly-A尾巴，于是QIAGEN的对策就是在RT kit里加了poly(A) polymerase先给那些无poly
人员开涮——而且是一个残酷的玩笑”。 研究miRNA的新工具 随着小分子RNA日益收受到研究人员的重视，很多研究小分子RNA的新方法不断推出。 小分子RNA的分离 由于小分子RNA可能参与分化、发育、组织生长、脂肪代谢等生理过程，在不同的组织和发育阶段的表达水平有所不同，进一步了解小分子RNA的生物功能需要确定其在各种生物样品中的表达水平，因而需要一种精确的定量纯化方法，从而得到可信的数据。 现行的RNA纯化方法包括有机溶剂抽提+乙醇
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