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- 2025年07月14日
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文献和实验培养细胞。 19、干细胞在更换外泌体专用间充质干细胞培养基的过程中，遇到干细胞生长缓慢，甚至死亡的现象，该如何处理？ 答：干细胞在更换培养基的过程中，对于培养环境比较敏感，尤其是从高营养环境（血清/HPL添加培养基）更换到低营养环境（化学成分确定培养基）的过程中会遇到干细胞生长缓慢，甚至死亡的现象，这些都是更换培养体系过程中经常遇到的问题。 解决方案 1：提高更换培养基时干细胞的融合度。细胞融合度从说明书中 20% 提高到50%-60% 时，然后更换外泌体专用间充质干细胞培养基，然后在细胞融合度 70%-80
的percoll分离（400 g×20 min）人骨髓MSCs，取界面处细胞层，离心后洗涤以2×105/cm2的密度接种，72 h后更换培养液，弃掉未贴壁细胞，以后每3 d换液一次。细胞长到80％汇合时1：1传代。 菊花与刀利用PERCOLL密度1.073分离大鼠MSC 时，用2400 rpm×20 mins后可见中间有一层约1～2 mm厚的白色层，仔细用吸管吸取这一层再用PBS离心2遍即可加培养基和胎牛血清培养即rMSCs。 周进明等利用密度为1.082的percoll分离小鼠MSCs
，使培养能力随批次而变化。另外，包含不确定的动物成分会为MSC的治疗应用带来难获管理机构批准的问题。 STEMPRO MSC SFM是完全限定的，意味着培养 基中的每一种成分都是已知量的，因而排除了显著的批间差。这个培养基能使MSC维持未分化状态超过9代，而用传统的加血清培养基培养的细胞在5代后就开始出现分化。 Invitrogen负责干细胞和再生药物的副总裁Joydeep Goswami博士表示，很多年来，科学家们一直在寻找开发一种可靠的无血清培养基，来培养间充质干细胞
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