ATCC CRL-1650细胞

ATCC CRL-1650细胞家猫肺细胞产品基本信息

出品公司:	ATCC
细胞名称:	ATCC CRL-1650(COS-1), COS-1, 非洲绿猴SV40转化的肾细胞
存储人:	Y Gluzman
种属来源:	非洲绿猴
组织来源:	肾
疾病特征:	正常
细胞形态:	成纤维细胞样
生长特性:	贴壁生长
培养基:	DMEM培养基(GIBCO,货号12800017)，90%；FBS，10%。
产品目录号:	CRL-1650
生长条件:	气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃,
传代方法:	1：2至1：6，每周2次。
冻存条件:	90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测:	阴性
安全等级:	2
应用:	该细胞是一个非洲绿猴肾成纤维细胞样细胞系适合要求SV40 T抗原的表达载体转染。
备注:	Nucleotide (GenBank) : AF093020 Chlorocebus aethiops clone M9 22k48 RNA, primary transcript. Nucleotide (GenBank) : AF093019 Chlorocebus aethiops clone M10 22k48 RNA, primary transcript.
参考文献:	Gluzman Y. SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants. Cell 23: 175-182, 1981. PubMed: 6260373 Mansky LM. The mutation rate of human immunodeficiency virus type 1 is influenced by the vpr gene. Virology 222: 391-400, 1996. PubMed: 8806523 Churchill MJ, et al. The rev-responsive element negatively regulates human immunodeficiency virus type 1 env mRNA expression in primate cells. J. Virol. 70: 5786-5790, 1996. PubMed: 8709194 Goodrum FD, et al. Adenovirus early region 4 34-kilodalton protein directs the nuclear localization of the early region 1B 55-kilodalton protein in primate cells. J. Virol. 70: 6323-6335, 1996. PubMed: 8709260 Suss-Toby E, et al. Toxoplasma invasion: the parasitophorous vacuole is formed from host cell plasma membrane and pinches off via a fission pore. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 8413-8418, 1996. PubMed: 8710885

ATCC CRL-1650细胞复苏细胞注意事项：
1）收到细胞后当天换液，全部更换成客户自己的新鲜培养基，放进培养箱，第二天再消化。
2）边观察边消化，根据细胞的形态，终止消化时间，采取以半分钟间隔吹打细胞边缘，如可吹打下来，即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。
3）随细胞有一份细胞操作说明书，请客户仔细查看。
4）记得加1%双抗，降低被污染的概率。另外尽早冻存留种，以备后用。
5）售后时间为一周，QC检测合格后发货保证细胞状态良好，收到细胞7天内出现状态不佳等情况请及时反馈，会有技术同步指导操作协助解决，如仍未养活免费重发。
6）收到细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请您务必重视。
7）刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞状态稳定后，再调回10%即可。
（其中1,2条针对于贴壁细胞，悬浮细胞详情请见细胞操作说明书）
ATCC CRL-1650细胞传代操作步骤：
（一）贴壁细胞传代
1）提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2）吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3）加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4）用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5）将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
（二）悬浮细胞传代
1）将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2）弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3）将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
细胞常见问题及解决方案：
1）培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2）细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。3）对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
4）对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
一毫升小管操作方法 小管内也是此细胞：
1. 用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）。
2. 严格无菌操作，用吸管吸出管中细胞至9ml完全培养基混匀。
3. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。
4.换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO7 培养。
ATCC CRL-1650细胞培养的环境
1.无污染环境：化学污染，微生物污染。
2.温度环境：37℃。偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强。
3.气体环境：95%空气加5%二氧化碳。
4.酸性环境：大多数细胞的适于PH为7.2-7.4,细胞耐酸性比较耐碱性大一些。
5.细胞培养基：合成培养基，天然培养基。