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文献和实验【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤!!!(从验证到阳性克隆的筛选)
小弟把最近一个多月来所做的工作,做了个总结,供大家一起分享,希望版主能加分,现在我还是0分,很多帖子不能阅览,希望版主加分,今后我实验有了新的进展,我会把总结发上来,和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF,目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结,再与大家分享。希望大家支持,绝对原创!!! 一.实验材料 1.菌珠 E.coli DH5α GS115酵母菌 2.质粒 PIC9K/VEGF165重组质粒 3.试剂 NB酵母氮源 G418 gl2、Not1
福禄克万用示波表190系列,充分体现了速度、性能和分析能力的完美结合。 万用示波表190系列具有在高档台式示波器才能发现的技术指标。它们可以提供200MHz带宽,2.5GS/s实时采样率以及先进的记忆和触发功能。同时具有坚固、紧凑、电池供电等特点。 ● 双通道 60、100和200MHz ● 高达2.5GS/s的实时采样率 ● 即触即测(Connect-and-ViewTM)自动触发,全过程手动触发模式并带有外部触发功能
, (3)电击后复活要快。 不过上面的确麻繁,理解加手熟就能达到,最后效率和菌种有关,一般能达到10的9方,有的能达到10的10方。不过现在我做普通转化就不麻繁,过夜菌彻底用EP管小离心,常温10%甘油洗干净,重悬后做电转,用LB或SOC复活立刻铺盘,只要洗的干净,还没有克隆转不出来的,半h就搞定了,只是每次都要鉴定,因为电转杯是反复用,怕别的残留污染。 7、问:转化了一个基因到毕赤酵母,蛋白有表达,但pcr无论如何也检测不到阳性的特性条带,该如何改进,请指点 参考见解:本人曾经遇到过同样情况,后来
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