毕赤酵母GS115菌种

【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤！！！（从验证到阳性克隆的筛选）

小弟把最近一个多月来所做的工作，做了个总结，供大家一起分享，希望版主能加分，现在我还是0分，很多帖子不能阅览，希望版主加分，今后我实验有了新的进展，我会把总结发上来，和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF，目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结，再与大家分享。希望大家支持，绝对原创！！！ 一.实验材料 1．菌珠 E.coli DH5α GS115酵母菌 2．质粒 PIC9K/VEGF165重组质粒 3．试剂 NB酵母氮源 G418 gl2、Not1

酵母表达系统

属(Hansenula)，毕赤酵母属(Pichia)，球拟酵母属(Torulopsis)等，能在以甲醇为唯一能源和碳源的培养基上生长，甲醇可以诱导它们表达甲醇代谢所需的酶，如醇氧化酶I(AOX1)，二羟丙酮合成酶(DHAS)、甲酸脱氢酶(FMD)等。AOX1的甲醇诱导表达量可占胞内总蛋白质的20％~30％，表明AOX1的合成受转录水平的调控。AOX1启动子(PAox )具有较高的调控功能，可用于外源基因的表达调控。甲醇营养型酵母表达系统以巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统最为常用，它由野生

毕式酵母表达常见问题及解析

， （3）电击后复活要快。 不过上面的确麻繁，理解加手熟就能达到，最后效率和菌种有关，一般能达到10的9方，有的能达到10的10方。不过现在我做普通转化就不麻繁，过夜菌彻底用EP管小离心，常温10%甘油洗干净，重悬后做电转，用LB或SOC复活立刻铺盘，只要洗的干净，还没有克隆转不出来的，半h就搞定了，只是每次都要鉴定，因为电转杯是反复用，怕别的残留污染。 7、问：转化了一个基因到毕赤酵母，蛋白有表达，但pcr无论如何也检测不到阳性的特性条带，该如何改进，请指点 参考见解：本人曾经遇到过同样情况，后来