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细胞耗氧率检测试剂盒(R01探针)-OCR

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      Oxygen Consumption Rate Assay Kit

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    • 供应商

      BestBio贝博生物

    • 规格

      200T

    BB-48211-1 BestBio贝博生物 细胞耗氧率检测试剂盒

    贝博® BBoxiProbe® 细胞氧气消耗检测试剂盒(Oxygen Consumption Assay Kit / Oxygen Consumption Rate Assay Kit / OCR Assay Kit)是利用贝博® 合成的特异性氧气荧光探针BBoxiProbe® R01来检测细胞外耗氧情况变化的试剂盒。可以通过简单的混合基于荧光酶标仪便捷的直接进行耗氧量测定。
    耗氧量分析是研究代谢的有用工具。耗氧量测量结果是细胞代谢功能,更具体而言是线粒体功能的关键性指示。通过这类指标来探究活细胞代谢,可为细胞功能以及代谢变化在疾病进展中的作用提供深入洞察。
    线粒体功能对细胞代谢、存活和能量产生至关重要。线粒体呼吸受损与病理状态(如癌症、缺血性再灌注损伤和神经退行性疾病)有关。线粒体毒性也是安全相关的抗药性和药物戒断症状的常见原因。
    BBoxiProbe® R01耗氧量分析可以实时测量全细胞或分离线粒体的耗氧量,是以高通量形式来评估用于代谢表征的细胞呼吸以及评估治疗对线粒体功能毒性作用的一种可靠方法。
    它可以使用荧光酶标仪在标准微孔板上进行有氧代谢的简单动力学测定。随着呼吸作用的进行,溶解氧被消耗,样品中的氧气浓度降低,导致 BBoxiProbe® R01 分析的信号增加,从而实现对耗氧量的测定。
    BBoxiProbe® R01是氧气敏感的荧光探针,最大激发波长为 455 nm,最大发射波长为 603 nm。其荧光通过分子碰撞与氧气反应,由O2淬灭,在无氧条件下荧光强度更高,反之有氧条件下荧光强度变低,因此荧光信号的量与样品中细胞外O2的量成反比,从而BBoxiProbe® R01可被用于监测细胞外氧气消耗的变化。在测定中,耗氧率由荧光信号随时间的变化计算。细胞耗氧量增加,荧光信号的变化率增加;反之,耗氧量减少,荧光信号的变化率降低。
    BBoxiProbe® R01与O2的这种反应是非破坏性且完全可逆的,BBoxiProbe® R01没有细胞毒性,其是化学稳定的,惰性的,水溶性的和细胞不渗透的,不能透过完整的细胞膜。因此还可以同时与糖酵解, 线粒体膜电位JC-1, ROS和细胞ATP 、LDH等检测的试剂结合使用,进行多参数检测。
    用BBoxiProbe® R01进行细胞外耗氧检测方法及其简单,不需要适用特殊的仪器设备,只需要荧光酶标仪之类的荧光读板设备即可。
    BBoxiProbe® R01采用可见光激发检测,相对于采用紫外光激发的检测试剂,细胞损伤更低,对细胞的毒害更小。结果更加准确客观。

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    操作步骤:
    1. 准备细胞模型。
          2. 培养好的待检测细胞移除培养基,用PBS洗涤细胞。
        3.加入100 μL新鲜培养基。
        4.加入4 μL BBoxiProbe® R01氧荧光探针,充分混匀。
        5.(可选)可以在此处添加待测试化合物(通常为1-10 μL)(如果需要的话)。
          6. 每孔加入100 μL氧气封闭液。【注】:
          7. 然后用该细胞板进行荧光细胞外O2消耗变化情况检测。激发波长455 nm - 468 nm,发射波长603 nm。测定荧光强度,每2分钟或3分钟读取一次。
        8. 绘制耗氧率曲线。
         9.计算每个样品的斜率值。



     

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