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北京百奥莱博科技有限公司
100T
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售北京现货SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)怎么卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)怎么卖
规格:100T
产地:国产|进口
编号:XH105
品牌:百奥莱博
试剂盒组成:
1, 封闭液:10ml,5%BSA
2, 生物素化二抗:浓缩液100ul。
3, SABC-FITC:浓缩液100ul。
4, SABC-POD:浓缩液100ul。
5, 稀释液:30ml。
6, 显色液:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B
7, 抗荧光衰减封片剂
试剂盒简介:
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG/山羊的免疫组化实验. DAB及FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂:
1.粘片剂多聚赖氨酸。
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC,刚可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2.热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3.滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4.用稀释液将一抗(如兔抗IL-10)按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.根据使用量,用稀释液将生物素化二抗浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。
如果想用荧光观察,请接下面步骤,如果想用DAB显色,请跳过6-7。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
如果想用DAB显色,请接8。
8.根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
9.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞片,常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5%Txiton X-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2(如果FITC,刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。
对于冰冻切片,固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
北京现货SABC双标试剂盒(免疫组化试剂盒)怎么卖极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·pET-32a(+)
编号:XH044
规格:25ug(0.5OD)
载体类型:大肠杆菌表达载体
载体大小: 5900 bp
载体宿主:大肠杆菌(E.coli)
细菌抗性:氨苄青霉素(Amp)
5" 测序引物:S Tag primer
3" 测序引物:T7 terminator primer
载体简介:
The pET-32 series is designed for cloning and high-level expression of peptide sequences fusedwith the 109aa Trx Tag thioredoxin protein . Cloning sites are available for producing fusionproteins also containing cleavable His Tag and S Tag sequences for detection and puri cation.Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression regionof the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented
so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corre-sponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using theT7 terminator primer.
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·羊抗鸡IgG(纯化抗体)
编号:XH097
规格:1mg/10mg
先以A蛋白纯化免疫球蛋白鸡IgG,用此鸡IgG免疫山羊,经过多次免疫后,测得山羊血清的效价达到要求后,动脉一次取血,静置得到血清,血清采用DEAE离子交换吸掉杂蛋白,再用硫酸铵沉淀,透析,定量等进一步处理得到纯化羊抗鸡IgG抗体,此纯化抗体可以用于标记,免疫沉淀,ELISA等常规免疫学实验。
如果客户对抗体纯度要求更高,本公司可以定做免疫亲和纯化的抗体,以鸡IgG结合在树脂上,吸附全部有活性的抗体,这样得到的抗体纯度更高,当然,成本也更高。
·TOP10受体菌
编号:XH045
规格:1ml
基因型:F-,supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
细胞种类
高效常用宿主菌E.coli HB101
E.coli HB101在基因重组实验起始时便十分常用。遗传性能稳定,使用十分方便,适合于各种基因重组实验。
保存:所有受体菌均为甘油保存,-70℃可长期保存,-20℃可保存一年。
·真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式)
编号:XH007
规格:50T/200T
原理简介
真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多,已报道的属达1万以上,种超过10万个。真菌通常又分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液液氮研磨。经过前期处理的菌液,再经过裂解液及蛋白酶处理后,玻璃奶吸附DNA,去掉其他杂质,,可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。
注意事项
1.由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶K处理,一般都可以得到一定量的基因组DNA,如电泳检测很弱,一般PCR都会有较好结果。
2.如果DNA提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取DNA*(代"片")段很短,成弥散条带,可减少玻璃珠处理时间。
操作步骤
1.样品的处理:
1)对于酵母菌,取1-2ml培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入300ul 裂解液,加入10ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约5-10min。
2)霉素(孢子也可相同处理):取50-100mg菌丝,加300ul裂解液,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入10ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约30min。
3)大型真菌(如蘑菇等):称取50-100mg样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复3 次,使样品研成粉末(如无液氮,可加300ul裂解液后用玻璃研磨器适当研磨),加300ul裂解液,加入10ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约5min。
2.加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,55℃水浴消化,15-30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次。
3.12000转离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。
4.在上清中加入三倍体积无水乙醇,充分混匀。
5.12000rpm离心5分钟,去上清,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul结合液,55℃水浴1-2分钟,核酸沉淀可溶解。
6.玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶,混匀,室温放置2分钟,10000转/分钟离心1分钟,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,70%乙醇重复洗一次,再用无水乙醇洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
7.室温放置10分钟(如果玻璃奶加量,请适当延长放置时间,此步为去除残余酒精,以免影响下游实验),加入50-100ul TE缓冲液混匀溶解,55℃水浴5分钟。离心,取上清为所提基因组。
8.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。
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