Western blotting检测试剂盒(DAB) 蛋白质

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名称：Western blotting检测试剂盒(DAB) 蛋白质研究
品牌：百奥莱博
规格：10T
编号：XH079
产地：国产|进口
试剂盒组成
1. 封闭试剂：30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白，缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP标记二抗，0.5ml，效价1：400。
4. DAB显色液（20×），5ml A+5ml B。
原理：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
操作步骤：
常规电泳转膜后，
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。 A@ 3) 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
3）将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4）用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5）用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
6）用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml抗体稀释液加入10ulHRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入加入二抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7）用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次10min。
8）配制DAB显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB显色液A、DAB显色液B各200ul，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。
注意事项：
1， 请根据一抗来源选择试剂盒。括号里面代标一抗的来源而不是标本的来源。
2， western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。
3， 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。
4， 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
5， TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

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F030841 BIOTIN标记小鼠抗鸡IgY(IgG)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Chicken IgY*BIOTIN
BTN130920 dITP溶液,100mM dITP Solution,100mM
HC0192 记号笔(红色) 油性
BTN131223 Zenker固定液 Zenker Solution
BOC-L-丙氨醇 Polyacrylic resin Ⅲ 79069-13-9
PY02-157 溴甲酚紫葡萄糖肉汤 250克
25988-63-0 Poly-L-Lysine 多聚-L-赖氨酸(7-15万)
F030230 HRP标记兔抗人IgG抗体 Rabbit Anti-Human IgG*HRP
BL0908 FITC标记兔抗狗IgG抗体
ARB10942 人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)elisa检测操作说明书 Human low-density lipoprotein-receptor-related protein,lrp-6 ELISA KIT
HC0328 单道雷勃彩色移液器(全彩)
HC0327 芬兰Thermo
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ARB12705 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)酶免分析 Rat glycogen phosphorylase mm,gp-mm ELISA KIT
SJ0696 超低分子量蛋白Marker Ⅰ (3.3-20.1kD)
ARB14007 鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA检测服务 Deer insulin-like growth factor binding protein 3,igfbp-3 ELISA KIT
CYB164014 羊抗兔IgG(1：500～2000)-HRP
BL0776 Matrigel(基底胶)
B0201 特级新生牛血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
BTN121102 柱式鼠尾DNAOUT Column Mouse Tail DNAOUT
ARB11674 人维生素K1(VK1)酶联免疫定量检测 Human vitamin k1,vk1 ELISA KIT
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·SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒
编号：XH106
规格：100T
试剂盒组成:
1， 封闭液：10ml，5%BSA
2， Bio-兔抗山羊：浓缩液100ul。
3， SABC-FITC:浓缩液100ul。
4， 稀释液：30ml。
5， 抗荧光衰减封片剂

试剂盒简介：
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG的免疫组化实验. FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂：
1．粘片剂多聚赖氨酸。
2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）
3． 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2．热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
3．滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4．用稀释液将一抗（如山羊抗IL-10）按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
5．根据使用量,用稀释液将生物素化羊抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulBio-兔抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
6．根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
7．滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后封片观察。


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4578-31-8 5-单磷酸腺苷 AMPNa2
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溴酚蓝 5-Aminolevulinic acid hydrochloride 115-39-9
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BTN90608 中提柱式BAC DNAOUT Midi Column BAC DNAOUT
PY02-274 乳糖发酵管培养基 250克
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脂肪氧化酶 Stearic Acid 9029-60-1
1-萘酚 Sodium stannate 90-15-3
DNA Marker Ⅰ Uric acid
BTN130525 蛋白磷酸酶抑制剂混合液2 Phosphotase Inhibitor Cocktail 2

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